荧光定量PCR的效率值

2020-07-15 08:54

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资料摘要：

荧光定量PCR的效率值可通过标准曲线获取。理想的反应效率为100%。效率较高（高于110%）一般说明反应过程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA质量较差，模板浓度过高及含有核酸钝化的残余物。反应效率较低（低于90%）的原因有试剂浓度不适（主要是引物、镁、Taq 、 DNA、聚合酶、尤其是在多重试验中）。造成效率低的其他因素有引物 T m之间的差异超过5℃或者是热循环条件不适。抑制作用和较低的效率会影响分析的灵敏度，导致动态范围减小及通用性降低。怎样解决呢？可在做冻干时降低模板浓度，优化工艺曲线等。试剂冻干机Pilot7-12T提供对药品、诊断试剂、蛋白、多肽、酶、抗体、抗原等进行冻干工艺优化，包括保护剂筛选、冻干曲线优化、冻干稳定性测试、冻干生产工艺设计等。

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冻干机试运行需要注意的情况及冻干过程

Pilot2-4M冻干机第一次运行或停放时间较长，需要运行或重新运行时，为确认设冻干机的性能状况，应首先做一次空载运行，这时冻干机的抽空速率和真空度可能要差一些，这属于正常现象，但要密切注意以下情况： 1）制冷机组的声音、发热。 2）冷冻机组的油位、色泽。 3）压缩机机头、机尾的结霜。 4）压缩机的温度。 5）循环泵的声音和压力。 6）放气阀漏气。 7）真空泵开启30min后的声音及排烟口的排烟量。 Pilot2-4M冻干机的冻干过程先是将冻干箱进行空箱降温到-40℃，然后把产品放到冻干箱内的板层上进行预冻（降温阶段）。待制品冻实后，就可以进行升华操作啦！制品的升华需要在高真空下进行，一般要求干燥箱内真空达到0.1mmHg以上。为了保证冰的升华能够持续进行，我们还需要将搁板加热，给予升华所需的热量。在冷冻干燥过程中，冻干可以分为升华阶段和制品的再干燥阶段。升华阶段要进行第一步加热，使冰大量升华。这个时候，制品温度不宜超过共熔点，通常保持在±10℃之间对冻干效果好！

冻干工艺委托开发服务

为用户提供冻干工艺优化、保护剂配方研发、冻干一致性评价、冻干代工生产，制药、医疗、美容、大健康、材料行业冻干流水线开发、冻干工艺开发等定制化整体解决方案。服务范围：冻干曲线摸索优化、冻干保护剂开发、冻干赋型剂开发、冻干生产放大、冻干一致性评价、GMP等级产品代工生产。化妆品冻干配方开发。制药、医疗、美容、大健康、材料行业冻干流水线开发、冻干工艺开发。擅长在蛋白及酶类抗体药物开发；分子、免疫、生化类等试剂、临床试剂冻干项目开发。冻干项目技术开发流程： 1.填写冻干开发需求书（可根据需要签订保密协议）； 2.提供样品交给实验人员，实验人员将进行分析研究，确立技术方案； 3.我们根据开发工艺报价，双方签订《冻干技术开发合同》； 4.实验人员开始技术开发并及时向用户汇报开发进展； 5.实验人员将开发结果向用户汇报； 6.将开发成果寄给用户，并附有实验报告，用户进行验收。

孢子浆水溶液冻干

在做孢子浆水溶液冻干时，先使用电子称称重方式，称取 8.0kg 纯化水，缓慢到入洁净的搅拌罐中，开启搅拌器；使用百分之一的 1kg 天平称取蔗糖粉末 800g 加入到搅拌罐中，搅拌混合均匀后待用。无高温灭菌设备，蔗糖溶液未进行灭菌。按要求将蔗糖溶液与孢子浆的体积比 2：1 加入，电子称称重孢子浆净重为4kg，全部加入搅拌罐。搅拌溶解后即为待冻干溶液。做冻干时选用Pilot10-15M冻干机，体积小，冻干效率好。建议制品上样高度为11mm,大约每盘的装量为2.5KG，包材使用不锈钢托盘即可。孢子浆水溶液冻干工艺：在-60℃的温度预冻大约5小时左右，在进行升华阶段干燥，温度大约从零下30℃上升至30℃，大约需要40多个小时。冻干结束后，样品方可出仓。冻干后，各盘样品均已干燥，使用洁净的金属铲进行刮取收样。

Pilot10-15S冷冻干燥机

Pilot10-15S系列冷冻干燥机性能：适合材料食品大健康活性物质原料冻干冻干效率比其它品牌效率提高30%以上全自动化程序，可全过程编程功能齐全，适合各类冻干原料性价比高相比同品牌优势明显配置国外品牌压缩机真空泵真空度好制冷能力强冻干工艺设计服务，贴心无忧

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