产气肠杆菌

产气肠杆菌操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，产气肠杆菌此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：产气肠杆菌取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 产气肠杆菌 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。产气肠杆菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY0722 人前列腺 PC-3细胞,

XY0723 人脐静脉血管内皮原代细胞,HUVEC细胞,

XY0724 人脐静脉血管内皮细胞,HUVEC细胞

XY0725 人脐静脉血管内皮细胞,HUVEC（原代）细胞

XY0726 人脐静脉血管内皮细胞,human HUVEC细胞

XY0727 人脐静脉细胞融合细胞,EA.hy926细胞,

XY0728 人脐静脉内皮细胞,HUV-EC细胞

XY0729 人脐静脉内皮细胞,HUVEC细胞

XY0730 人脐静脉内皮细胞,HUVE-12/CRL2480细胞

XY0731 人脐静脉内皮细胞,ECV304细胞,

XY0732 人脐静脉内皮细胞,ECV304细胞

XY0733 人脐静脉内皮 (具有T24细胞特性) ECV-304细胞

XY0734 人葡萄膜黑色素细胞,UM细胞

XY0735 人皮肤纤维微细胞系 Malmc细胞

XY0736 人皮肤鳞癌细胞,A431细胞

XY0737 人皮肤黑色素瘤细胞,SK-MEL-1细胞

XY0738 人皮肤成纤维细胞系 BJ细胞

XY0739 人皮肤成纤维细胞,HSF细胞

XY0740 人皮肤成纤维细胞,Hs 865.Sk细胞

XY0741 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞

XY0742 人皮肤癌细胞系 HS-4细胞

XY0743 人皮肤癌细胞系 HS-1细胞

XY0744 人皮肤T细胞淋巴瘤 Hut102细胞

XY0745 人胚纤维细胞系 HEF细胞

XY0746 人胚胎胰腺组织来源细胞,CCC-HPE-2细胞

XY0747 人胚胎眼巩膜成纤维细胞,HFSF细胞

XY0748 人胚胎眼Tenon＇s囊成纤维细胞,HFTF细胞

XY0749 人胚胎肠粘膜细胞,CCC-HIE-2细胞

XY0750 人胚肾细胞--用于慢病毒包装 293LVT细胞

XY0751 人胚肾细胞（亚系克隆）FIP293细胞

XY0752 人胚肾细胞,AD293细胞

XY0753 人胚肾细胞,AAV-293细胞

XY0754 人胚肾细胞,2V6.11细胞

XY0755 人胚肾细胞,293细胞

XY0756 人胚肾细胞,293XL-hTLR9细胞

XY0757 人胚肾细胞,293TN细胞