铜绿假单胞菌

铜绿假单胞菌操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，铜绿假单胞菌此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：铜绿假单胞菌取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 铜绿假单胞菌 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。铜绿假单胞菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。 

XY0517 人纤维肉瘤 HT-1080细胞

XY0518 人胃粘膜细胞,GES-1细胞

XY0519 人胃腺癌细胞株 SGC-7901细胞

XY0520 人胃腺癌细胞（低分化） BGC-823细胞

XY0521 人胃腺癌细胞,SGC-7901细胞

XY0522 人胃腺癌细胞,NCI-N87细胞

XY0523 人胃腺癌细胞,MCG803细胞

XY0524 人胃腺癌细胞,Human AGS细胞

XY0525 人胃腺癌细胞,BGC-823细胞

XY0526 人胃腺癌细胞,AGS细胞,

XY0527 人胃上皮细胞,GES-1细胞

XY0528 人胃癌细胞系 MGC-803细胞

XY0529 人胃癌细胞系 HS-746T细胞

XY0530 人胃癌细胞（未分化）HGC-27细胞,

XY0531 人胃癌细胞,SNU-638细胞

XY0532 人胃癌细胞,SGC7901细胞

XY0533 人胃癌细胞,NUGC-3细胞

XY0534 人胃癌细胞,NCI-N87细胞

XY0535 人胃癌细胞,MKN-45细胞

XY0536 人胃癌细胞,MKN-28细胞

XY0537 人胃癌细胞,MGC80-3细胞,

XY0538 人胃癌细胞,Hs 746T细胞

XY0539 人胃癌细胞,BSG823细胞

XY0540 人胃癌细胞,AZ-521细胞

XY0541 人胃癌细胞,9811C11细胞

XY0542 人胃癌顺铂耐药株 SGC7901/DDP细胞

XY0543 人胃癌耐药顺铂细胞株 SGC-7901/DDP细胞

XY0544 人未分化胃癌细胞,HGC-27细胞

XY0545 人微血管內皮細胞株 HMEC-1细胞

XY0546 人外周血嗜碱性白血病细胞,KU812细胞

XY0547 人退行性癌细胞,Calu-6细胞

XY0548 人套细胞淋巴瘤细胞,JeKo-1细胞