Proteonavi S5的溶出行为2 & 3～与他社色谱柱的比较、柱温的影响、耐久性试验～

Proteonavi S5的溶出行为2　～与他社色谱柱的比较及柱温的影响～

Proteonavi S5的溶出行为3　～柱温80℃条件下的耐久性及峰形考察～　

Keywords : Proteonavi、肽类、蛋白质、缓激肽、0.1 vol%HCOOH、柱温80℃、耐久性、峰形

Proteonavi S5是一款以孔径为30 nm的硅胶作为基材、键合C4基团的蛋白质?肽类化合物分析色谱柱。上回的《Proteonavi S5的溶出行为～与他社色谱柱的比较～ 1》中介绍了以6种蛋白质作为样品，将ProteonaviS5与他社色谱柱进行溶出行为比较的试验。

本次，以5种肽类化合物（缓激肽、后叶催产素、血管紧缩素II、神经降压素及血管紧缩素I）作为样品，将Proteonavi S5与一款填料表面带有正电荷的杂化型色谱柱（孔径13 nm、粒径3.5 μm ）进行比较。

图1为所得结果。流动相为添加了0.1 vol%甲酸的水-乙腈系统，在梯度条件下对两款色谱柱进行了溶出行为的考察。

结果，他社色谱柱对于肽类化合物的整体保留较弱，且缓激肽的峰未能得到确认；与此相对，Proteonavi S5对这5种肽类化合物均得到了良好峰形以及充分的保留与分离。

图1　两款色谱柱分析所得色谱图

～柱温与溶出行为～

对肽类化合物进行分析，有提高柱温的做法。例如，《第17改正日本药局方》中，环孢菌素是在柱温80℃附近的一定温度下进行分析的。

在此，以环孢菌素A作为原料，在等度条件下对色谱柱柱温变化及相应的溶出行为进行了考察。图2为所得结果。

如图2，随着柱温的上升，环孢菌素A的保留逐渐减弱，峰形也愈发尖锐。一般来说，与小分子相比，大分子的扩散速度较慢，因此色谱峰形有展宽的趋势，而设定较高的柱温可以使峰形变得尖锐。

像这样，在对肽类化合物进行分析时，设定较高柱温可以使分析时间缩短，提高定量准确性。

图2柱温与环孢菌素A溶出行为的关系

图3环孢菌素A的保留时间维持率（％）与首次进样和连续500次进样所得色谱图

对于环孢菌素A这样的高分子化合物，随着柱温的上升，其扩散速度加快，因而峰形会更尖锐。进一步，针对提高柱温的效果，以环状肽类化合物表面活性肽（M.W. 1036.3）作为分析对象，将柱温分别设定为40℃和80℃进行分析。图4为分析所得结果。将柱温由40℃提高到80℃，保留变弱的同时，表面活性肽的理论塔板数提高了1400。

综上，在对肽类化合物进行分析时，在高柱温条件下使用耐久性良好的ProteonaviS5色谱柱进行分析，提高柱温是获得尖锐峰形的技巧之一；在缩短分析时间的同时，检测灵敏度和定量准确性也能得到提高。

图4　柱温40 ℃及80 ℃条件下对表面活性肽的分析色谱图