【飞诺美色谱】奶粉中香兰素的测定

1. 参考方法 博纳艾杰尔内部方法。 香兰素亦称香草素、香草醛 等，学名为 3-甲氧基-4-羟基苯 甲醛，根据欧盟专家委员会2000 年 2 月 24 日报道，大剂量可导 致头痛，恶心，呕吐，呼吸困 难，甚至损伤肝肾功能。

限量标准 中华人民共和国国家标准《食品添加剂使用标准》 (GB2760-2011) 规定，较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大 使用量为 5mg / 100mL，其中 100 mL 以即食食品计，生产企 业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量；婴幼儿谷类 辅助食品中可以使用香兰素，最大使用量为 7mg / 100g，其 中 100 g 以即食食品计；凡使用范围涵盖 0 至 6 个月婴幼儿 配方食品不得添加任何食用香料。 国家标准中只规定了限值，未有检测方法。本实验使 用天津博纳艾杰尔科技有限公司的 Cleanert® PAX 固相萃取 小柱和 Venusil® XBP C18(L) 液相色谱柱，建立了一种奶粉 中香兰素的检测方法，经实验验证，该方法简单、快速、 准确度高。 2. 实验材料 水(pH=4.5)：取 100 mL 水，用乙酸调节 pH 至 4.5； 2%乙酸铅溶液：称取乙酸铅 2 g，加水稀释并定容至 100 mL； 5% 氨水溶液：取氨水溶液 5 mL，加水稀释并定容至 100 mL； 5% 酸化甲醇：取甲酸5 mL，加甲醇95 mL混匀； 香兰素储备液(1mg / mL)：准确称取香兰素标准 10 mg， 加水稀释并定容至 10 mL； 固相萃取柱：Cleanert® PAX (规格为 60mg / 3mL)， 使用前分别用 3 mL 甲醇和 3 mL 水活化； 液相色谱柱：Venusil® XBP C18(L) 5 μm，150 Å，4.6×150 mm； 针式过滤器：亲水型 PTFE (0.45 μm，13 mm)。 LC-10F 高效液相色谱系统； Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪； 高速离心机 (转子 50 mL×6)； 氮吹仪； 12 位固相萃取装置。

3. 实验步骤 准确称取奶粉试样 1 g(精确至 0.01 g)于 50 mL离心管 中，加入 pH=4.5 的水溶液 5 mL，混匀超声提取 5 min，加 2% 乙酸铅溶液 2 mL，混匀后静置 2 min，8000 r/min 离心 10  min；取上清液用 5% 氨水溶液调节 pH 至中性；将上清液 全部加样至活化好的 Cleanert® PAX 小柱，然后分别用 3 mL  5% 氨水溶液和 3 mL 甲醇淋洗小柱，弃去淋洗液；用 3 mL  5% 酸化甲醇洗脱(以上固相萃取操作通过 Qdaura® 卓睿全自 动固相萃取仪完成)，收集洗脱液于30℃下氮气吹干，用 1  mL 流动相重新溶解，过滤，待测。 4. 色谱条件 色谱柱：Venusil® XBP C18(L)， 5 μm，150 Å， 4.6×150 mm； 流动相：A (0.02 mol/L 的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节 pH=4.0):B (乙腈) = 90:10； 流速：1.0 mL/min； 进样量：20 μL； 波长：276 nm； 柱 温：30℃。 5. 实验结果及谱图 量取一定量香兰素标准储备液，分别用水稀释至 1 μg/ mL、5 μg/mL、10 μg/mL、25 μg/mL 和 50 μg/mL，按照 4 检 测条件依次进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合 标准曲线方程，结果见表1；表2，3为回收率结果实验。