【飞诺美色谱】奶粉中雌酮、雌二醇、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮的检测

1. 参考方法 博纳艾杰尔内部方法。 2. 实验材料 Cleanert® PEP 吡咯烷酮化聚苯乙烯/二乙烯基苯固 相萃取柱 (100mg / 6mL，P/N:PE1006，博纳艾杰尔科 技)；Cleanert® Silica 硅胶固相萃取柱 (1000mg / 6mL，P/ N:SI0006，博纳艾杰尔科技) ； 液相色谱柱 (Bonshell C18，2.1×100 mm，2.7 μm，P/ N:SC921002-0，博纳艾杰尔科技)； 标准品：雌酮 (CAS.No. 53-16-7)、雌二醇 (CAS.No. 50- 28-2)、醋酸甲地孕酮 (CAS.No. 595-33-5)、醋酸氯地孕酮 (CAS.No. 302-22-7 )，购自中国药品生物制品检定所。 3. 实验步骤 Cleanert® PEP 样品提取净化法 提取：取 2 g 奶粉，加标，然后加 12 mL 80% 乙腈， 涡旋混匀两分钟后，离心 (9000 r/min，6 min) 取 3 mL 上清 液，加入 9 mL 超纯水稀释，涡旋混匀后，待过 Cleanert® PEP 柱净化。 净化步骤： 活化：以 5 mL 乙腈，5 mL 水活化 Cleanrt® PEP； 上样：把上述稀释后的样品溶液过柱，流速控制以 1 mL/min 为宜； 淋洗：待样品溶液完全通过小柱后，用 5 mL 5% 乙腈 淋洗小柱，然后真空抽干 3 min； 洗脱：以 3-5 mL 乙腈洗脱目标，收集流出液； 浓缩：收集液以氮气吹干 (40℃水浴)，后以50% 甲醇水 定容至 1 mL，混匀后过 0.22 μm 尼龙针式过滤器 过滤，进 LC-MS/MS 分析。 (以上萃取操作通过 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪完成) Cleanert® Silica样品提取净化法 提取：取 2 g 奶粉，加标，然后加 12 mL 乙腈，涡旋混 匀两分钟后，离心 (9000 r/min，6 min) 取 3 mL 上清液，待 过 Cleanert® Silica 柱净化。 净化步骤： 活化：以 5 mL 乙腈活化 Cleanrt® Silica 小柱； 上样：把上述提取液过柱，收集流出液； 淋洗：以 5 mL 乙腈洗涤小柱，收集流出液； 浓缩：合并以上流出液，以氮气吹干 (40℃ 水 浴)，后以 50% 甲醇水定容至 1 mL 混匀后 0.22 μm 尼龙针式过滤器过滤，进 LC-MS/MS 分析。 (以上萃取操作通过 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪完成)

4. 色谱条件 孕激素(醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮)测定 液相色谱条件：Bonshell C18，2.1×100 mm，2.7 μm； 流动相：A:0.1%甲酸水，B:甲醇； 流 速：0.3 mL/min； 柱 温：40℃； 进样量：10 μL； 参考质谱条件：电离源：电喷雾正离子模式。 雌激素(雌二醇、雌酮)测定 色谱条件：Bonshell C18，2.1×100 mm，2.7 μm； 流动相：A:水，B: 乙腈； 流 速：0.3 mL/min； 柱 温：40℃； 进样量：10 μL； 参考质谱条件：电离源：电喷雾负离子模式。 5. 实验结果及谱图 结果见图1、图2。用 Cleanert® PEP (反相)或 Cleanert®  Silica (正相) 两种净化手段均可到达满意的回收率和净化效 果，添加浓度在 25 ppb 时回收率可达到 80% 。用 Bonshell  色谱柱可以实现样品的快速分离，大大提高工作效率。雌 二醇和雌酮两种激素，质谱响应偏低，质谱条件需要进一 步优化。本实验结果采用单点定量判定，结果可能有失偏 颇，详细数据需做基质添加标准曲线确证，方法的精密 度，稳定性等亦需要进一步确证。