紫外可见光谱法-DNA熔点的测定

解决方案 概述：

   DNA加热到一定温度时，DNA的双螺旋结构就会发生裂解，DNA碱基互补的主要作用力氢键结构就会被破坏，这种变性过程称为DNA熔解，通常将DNA变性，即增色效应达到一半时的温度，称为DNA解链温度，也称为熔解温度或者叫做DNA熔点(Tm)。最常用和最简单的DNA熔解测定，是紫外可见吸收光谱法，在紫外光谱法中表现为吸光度的增加（增色效应）。吸收强度与温度关系曲线的拐点即确定的熔点。

   德国耶拿分析仪器股份公司，采用紫外分光光谱仪SPECORD® 200 PLUS和帕尔贴控温装置相配合，具有控温精度高，升温无延迟等优点，根据DNA测定应用要求，在不同的计量模式下，可以随意编程温度程序。


    利用超微量比色皿，对质粒DNA水溶液和小牛胸腺两种样本的DNA熔点进行了测定，样品光谱在220nm和300nm处有最大吸收峰。分别采用了‘同步’测量模式和‘循环’测量模式。

    结果表明，在DNA样本熔化过程可以很好地显示在两个测量模式中。小牛胸腺DNA的吸光度的增加比天然DNA发生温度低。天然DNA通常在85°C以上高温下经常融化，小牛胸腺DNA熔点高于此温度。此外，碱基对比例越高，熔点也会降低。




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关于“帕尔贴恒温池架”：

高性能的帕尔贴温度控制系统，实现 -5-105 ℃宽量程的控温范围，控温精度为±0.1℃。

适合需要精确控制温度的分析测量，在生化领域及化学反应控制方面广泛使用，如酶动力学分析，DNA熔点测量等。