使用FLowCam研究——抗 PD-L1 单抗的质量控制

FlowCam具备高灵敏度，高质量的颗粒图像，精确的浓度检测和直测粒径等性能，从一次实验结果中就能够获得“颗粒有多少”，“颗粒有多大”，“颗粒是什么”等信息。

目的：研究建立抗程序性死亡受体配体 1（programmed cell death protein ligand 1，PD-L1）单抗的质量控制方法。

方法：利用成像毛细管等电聚焦电泳（imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis，iCIEF）、肽图对抗 PD-L1 单抗进行鉴别；利用还原 / 非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳 （capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate，CE-SDS）、分子排阻高效液相色谱（size exclusion-high performance liquid chromatography，SEC-HPLC）、离子交换高效液相色谱（ion exchange-high performance liquid chromatography，IEC-HPLC）对抗 PD-L1 单抗的纯度进行控制；利用细胞结合抑制法和转基因细胞法测定抗 PD-L1 单抗的活性；利用光阻法和液流成像分析法对不溶性微粒进行检测和分析。

结果：抗 PD-L1 单抗的 iCIEF 检测结果具有特征性主峰，肽图检测具有相应特征峰，起到很好的鉴别作用。还原 CE-SDS 的轻链与重链峰面积之和的百分比为（98.37±0.21）%，非还原 CE-SDS 主峰峰面积百分比为（96.33±0.15）%；SEC-HPLC 单体的峰面积百分比为（99.43±0.02）%；IEC-HPLC 酸性区峰面积百分比、主峰峰面积百分比、碱性区峰面积百分比分别为（13.63±0.40）%、（80.00±0.36）%、（6.37±0.15）%。细胞结合抑制法与转基因细胞法的活性检测均呈现剂量反应曲线，反映抗 PD-L1 单抗剂量依赖性地阻断程序性死亡受体 1（programmed cell death protein 1，PD-1）与 PD-L1 的结合及后续的生物学效应。光阻法检测≥ 10 μm 及≥ 25 μm 的不溶性微粒数分别为（1.33±0.58）粒·mL -1 和（0.00±0.00）粒·mL -1 ；液流成像分析法检测 2~10 μm、≥ 10 μm及≥ 25 μm 的微粒数分别为（1 243.67±242）粒·mL -1 、（45.67±16.07）粒·mL -1 和（10.00±5.00）粒·mL -1 ，其中，蛋白聚体占 87.45%，非蛋白聚体占 12.55%。

图 1 抗 PD-L1 单抗参比品（A）与样品（B）的 iCIEF 代表图谱

图 2  抗 PD-L1 单抗参比品（A）与样品（B）的肽图代表图谱

讨论：研究建立了抗 PD-L1 单抗的多种质控方法，为国内抗 PD-L1 单抗的质量检测提供了参考依据。

郭莎，王开芹等，抗 PD-L1 单抗的质量控制研究，药物分析杂志，2019，39（1）：13-22

Fluid Imaging Technologies(FlowCam)公司成立于1999年美国缅因州斯卡伯勒市，其研发并生产的FlowCam系列仪器是将流式细胞法组合到数字成像显微镜中，基于图像分析法的流式动态成像颗粒分析仪，它使颗粒分析变得更快，更简单。具有革新意义的FlowCam系列仪器被广泛应用于研发和质量控制，应用涉及全球多个领域。

流式颗粒成像分析系统FlowCam®8000系列具有以下优点。

1.测量粒度和颗粒形状-对每个颗粒成像后都可以获得30多种形态学测量结果。

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