主题：【第二届网络原创作品大赛】周小样的色谱之路——正相和反相流动相体系在Agilent1100上的转换

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《第二届网络原创作品赛》正相和反相流动相体系在Agilent1100上的转换


    小样做色谱已经有四年多了，从接触色谱一直混迹于各个色谱论坛，上的最多的是中国色谱网，那里面液相讲的比较多，最近在查液质方面的资料才转战到仪器信息网，没想到碰上网络大赛，看到那么多的专家，很惭愧小样只能算一个新手了，不过还是把我的一些经历写出来和大家分享一下。
   
话说事情发生在两年多前，那时候小样刚接触Agilent1100没多久，一天公司要做一个手性化合物的检测，本来任务是交给我们领导的，可是因为要周六加班，他就安排我来做这个事情了。小样的心理真是又紧张又激动，即担心做不好又有点跃跃欲试。原谅我一直对自己倍儿有信心，罗嗦一大堆我们还是赶紧进入正题吧。
   
这是一个手性化合物，还是没紫外吸收的，不过没关系有文献可以做衍生化，这个自然由合成的人来完成，不用我操心。关键是方法，我查到的资料是用正己烷和异丙醇走梯度，梯度可以随时调整，但是平时这台机器都是做的反相色谱，正相色谱我根本没换过。好在平时论坛混得多，知道可以用异丙醇做过度溶剂。我先把柱子下掉，接了个瓶子，然后把原来水相和乙腈的管路都插到异丙醇里，开始purge，天啊压力都开始升高，还好在允许的范围内，没有停泵，持续了十几分钟，我又把水相的管路拿出来放到正己烷里，还是压力很高，时间怎么那么漫长啊，等啊等啊，都不记得用了多长时间了，总算压力开始下降，直到平稳。额的个神呀，Agilent的管路怎么那么长啊？？至此反相色谱到正相色谱的转换完成。然后接上柱子平衡，做样的过程倒是很顺利，优化了几个条件，就搞定了，时间过得真快居然到了下班的时间，原来我光溶剂转换就用了一个多小时。
   
第二天领导来了又做了几个样品的检测以后，又开始换回反相色谱。可怜我们只有这一台液相。大概是他没经历昨天漫长的转换过程，走了没几分钟就换到水相和乙腈了，结果压力骤然升高，停泵了。找到原因以后总算顺利解决了。至此第一次正相和反相流动相体系的转换顺利完成。经过这次以后小样做了总结，随后又进行了n次这样的转换，都异常顺利，而且缩短时间四十分钟就可以完成一次转换。在这个过程中小样学到了很多东西，稍后我会把简化的程序写下来大家分享。

首先，反相到正相的转换。
1.把水相的管路放到乙腈溶剂瓶中，purge这个通道，大概用时7，8分钟。
2.把水相的管路和乙腈的管路都放到异丙醇溶剂中，分别继续purge，用时大概16，7分钟，这个时候注意压力的变化。
3.把水相的管路放到正己烷的溶剂中，继续purge7，8分钟。直到转换完成。

其次，正相到反相的转换。
1．把正己烷的管路放到异丙醇溶剂中，purge这个通道，用时7，8分钟。
2．把正己烷和异丙醇的管路都放到乙腈溶剂中，分别purge 7,8分钟。
3．把原来水相的管路放回水相中，purge 7,8分钟。

我们来做个讨论
1．什么样算purge好了。在每一次的purge过程中都要注意压力的变化，溶剂的转换，即使是互溶的溶剂也会有个压力变化，这一个过程压力都是从低开始升高，持续一段时间再逐渐降低，到平稳。所以我一般都是观察压力的变化来判断流动相的转换是否完成。
2．这里面用到异丙醇溶剂，可以用来冲洗一下管路，一举两得。不接柱子接上个两通阀，能看到检测器检测出好多乱七八糟的峰，说明管路真的很脏。当然这个时候应该用正常流速的。
3．这里说一下手性的检测，用手性柱一般测的是ee值，首先需要一个混旋物定一下位置，这样才好知道你所检测的左旋和右旋的化合物分别在哪儿 ，算ee值的时候是(e1-e2)/(e1+e2)*100%，其实我们每次测ee值都合格，但是测旋光度就不一定合格了，为什么呢，因为我们的样品含水分比较大。

    同样的操作我也在Shimazu2010上做过，神啊，那个要复杂的多，岛津的工作站确实比安捷伦复杂好几倍，不太熟练的同学一定要慢慢来，千万不能贸然接柱子，有的手性柱是不能进水的，一万多一根呢，金贵着呢。
   
小样的色谱之路还算不错，最开始用的的岛津的等度洗脱，手动进样，后来又用了Agilent1100和Shimadzu LC-2010，不久还能学到LC-MS。说不定大赛活动结速之前还能写一篇关于采购LC-MS的呢。
   
本来很想能帖一张色谱图给大家看看的，可惜已经离开上一家单位了，只好手动画一张压力示意图，大家凑合看看吧。