腺病毒感染目的细胞预实验

实验目的：确定腺病毒感染目的细胞的最di病毒量，各个细胞株的腺病毒转导效率都不太一样， 其中尤以淋巴细胞株最难转导。

腺病毒感染目的细胞:

因为不同细胞的MOI不同，所以在正式实验前，需设计预实验以确定目的细胞中加入的病毒数。

注：MOI值: MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数,实际的含义即为每个细胞被多少个有活力病毒颗粒所感染。不同实验室、不同操作手法及不同细胞系条件下所对应的细胞最jiaMOI都是不同的，在正式实验之前强烈建议实验操作者进行一次摸索最jiaMOI的预实验。

细胞准备: 将状态良好的目的细胞接种到24孔板，使细胞密度约为1×105/ml。

腺病毒感染目的细胞具体实验步骤：

1.    实验前一天收集处于对数生长期，生长状态良好的目的细胞，用完全培养基稀释至1×105cells/mL，接种于96孔板（至少接种15个孔的量），每孔接种100  μL上述细胞悬 液（即1×104 cells/well）。5% CO2、37 ℃ 二氧化碳培养箱内培养过夜。

2.    准备12个无菌的1.5 mL EP管，分别加入180 μL的完全培养基。

3. 有限稀释法稀释病毒，从10-1~10-12：取20 μL腺病毒原液加入到第1个管的180 μL完全 培 养基中做1:10稀释（10-1）；然后以此为起点，从第1个管取20 μL稀释液到第二管 再做1:10稀释（10-2），直至稀释到10-12。

4.    从孵箱取出96孔板，显微镜下观察确定细胞生长状态均良好。吸掉孔内旧的培养基， 按10-1~10-12的浓度梯度，依次加入100 μL的病毒稀释液到接种有目的细胞的96孔板中， 每种浓度接种一孔，没有加入病毒液的细胞孔中加入同样体积的完全培养基作为对照 组。37  ℃，5%CO2二氧化碳培养箱内培养。

5.    6-12 h以后观察细胞状态。如果细胞实验组与空白组无明显差异，表明病毒对细胞无明 显毒性反应，不要换液，继续培养。

6.    由于腺病毒感染能力强，请分别在感染后的12、24、48 h观察细胞中的荧光表达情况。 综合细胞生长状态以及荧光表达量来判断具有最jia作用效果的病毒稀释度，并以此稀 释度作为后续试验的依据。