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编号：YM-K015
产品名称：庆大霉素纸片
单位：瓶
规格：10ug 120ug
备注：GM10
庆大霉素纸片上海远慕生物有限公司专业供应各种生物试剂、生化试剂，单抗多抗抗体，各种二抗，标 记抗体，抗体抗原，蛋白多肽产品，Elisa酶联免疫试剂盒，各种细胞株、细胞系，各种 动物血清，金标试剂盒，放免试剂盒，培养基，毒素 的产品， 实时价格和产品详细说明 ，敬请来电咨询！
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PCR扩增产物的克隆—TA克隆法
实验方法原理 TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3'T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5'磷酸基和3'羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最hou产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底，可对载体进行5'除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA片断的3'OH末端与5'端，所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5'端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最da限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。
生物产业
2019/02/18
企业名称
上海远慕生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
有限责任公司(自然人独资)
信用代码
91310120071207690P
成立日期
2013-06-19
注册资本
人民币300.0000万元整
经营范围
从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,实验室设备、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)、仪器仪表、五金交电、电子产品、机械设备、计算机、软件及辅助设备(除计算机信息系统安全专用产品)、电动自行车的批发、零售.(依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动)
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