影响色谱柱使用寿命的因素（HPLC）

广州绿百草

2021/07/12 10:59

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流动相使用水溶液作为流动相时，水溶液中的细菌等微生物容易滋生。当使用有机酸缓冲液的水溶液保护色谱柱时，一些霉菌可能会在色谱柱中滋生并堵塞固定相颗粒之间的间隙。

由于湿填料技术的出现，常用的的直径 HPLC色谱柱填料一般小于10um，流动相中的颗粒杂质容易先沉积在柱头上，然后慢慢堵塞柱子。

流动相的pH值对色谱柱也有影响，特别是对化学键合硅胶填料。水溶液的最适合pH值范围在2到7.5之间。当pH大于8时，硅胶会释放并生成絮凝物堵塞HPLC柱，且难以恢复，柱效迅速降低，甚至完全失效。

当缓冲液中加入甲醇或乙腈等有机溶剂时，盐的溶解度会降低，盐会沉淀并堵塞柱子。同时，流动相中的有机溶剂和盐分会腐蚀色谱柱头的筛板，造成柱头下沉。

流动相的极性对色谱柱也有一定的影响。对于硅胶柱，甲醇、水、冰醋酸等极性较大的物质会破坏填料。反之，对于化学键合硅胶，正丁醇、二氯甲烷等极性较小的物质也起到同样的作用。碱性溶液会损坏阳离子交换树脂色谱柱，而酸性溶液容易损坏阴离子交换树脂色谱柱。

样品和固定相 如果少量或痕量样品不能溶解在流动相中，它会在通过固定相时堵塞色谱柱。样品中的颗粒杂质也会堵塞色谱柱。糖类、蛋白质等样品成分在通过色谱柱时会被不可逆吸附，从而覆盖固定相的活性位点。样品组分也会与固定相发生反应，尤其是氨基柱，因为氨基容易与酸酐和酮形成席夫缩合，减少了活性位点，缩短了保留时间。

色谱柱键合相基团脱落、固定相分解和活性基团变性会影响柱效和保留时间的显着变化。大多数键合相通过硅-氧-硅键（Si-O-Si）与硅基体相连，形成带有有机基团的固定相Si-O-Si-R（R为CnH2n+1）。硅-氧-硅键在水溶液中可能因水解而断裂，导致键合基团脱落。