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Agilent Cray60紫外可见分光光度计使用心得
Agilent Cray60紫外可见分光光度计简介
万华化学(宁波）有限公司 质量管理与检验中心 马盼盼
Cary 60简介
安捷伦Cary 60型紫外可见分光光度计继承了其前身Cary 50突破性的脉冲氙灯技术，并对电路系统进行了优化设计，具有高测试性能，灵活的操控方式和简便的使用方法，是脉冲氙灯技术的领导者。
仪器的主要特点：
氙灯的优势：Cary 60 紫外-可见分光光度计是一款双光束仪器，配备的强大氙灯每秒可闪烁 80 次，可在3秒内扫描全波长范围（190-1100nm）。氙灯仅在采集到数据时才照射样品，因此可防止敏感样品发生光分解，并降低功耗。高聚焦光束是准确、可重现地测量小样品量的最佳选择。同时该款氙灯可连续运行20000-35000小时；
可靠且灵活：Cary 60 紫外-可见分光光度计的设计不仅适用于重复性常规应用，也适用于测量要求不断变化的更高级应用。样品室可配备多种附件，以用于各种样品和应用类型。附件包括一个18池更换装置，可实现高样品通量；
抗室光干扰：Cary 60 紫外-可见分光光度计由于独特的光学设计，能够免疫室光干扰引起的失真。室光免疫测量不受室内光线影响，无需关闭样品室盖，方便添加试剂和配置各种附件。
4.性能优异：安捷伦Cary 60紫外分光光度计除了采用高效、准确和灵活的设计外，还有液体、固体、粉末、温控等多种附件可选，性能优异，维护简单。在应用领域方面，可用于水质、食品、饲料、生化样品、药品以及环境样品等定性定量分析。
仪器原理
定性定量基础：紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
物理原理：当一束平行的单色光通过均匀、非散射性的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比，即朗伯-比耳定律，该式是分光光度法的定量分析依据。
仪器原理：光源发出的复合光通过单色器被分解成单色光，当单色光通过样品室时，一部分被样品吸收，其余未被吸收的光到达检测器，被转变为电信号，经电子电路的放大和数据处理后，通过显示系统给出测量结果。
仪器结构
仪器外框架
图1 1—样品仓盖 2—样品仓前门 3—Cary 60电源按钮、指示灯
电源按钮上的指示灯具有多种显示状况：
颜色 | 状态 | 说明 |
绿色 | 长亮 | 已通电；仪器已校准／初始化，但没有扫描。 |
闪烁 | 正在扫描（不存在故障情况）。 | |
橙色（黄色） | 长亮 | 仪器正在初始化（没有扫描） |
闪烁 | 在初始化／校准的同时正在扫描 | |
红色 | 长亮 | 初始化或校准失败。仍允许进行仪器操作 |
闪烁 | 初始化或校准失败后，仪器正在扫描 |
结构组成：光源、单色器、吸收池、检测器、数据处理系统
图2 结构图
图3 仪器内部示意图
光源：提供符合要求的入射光的装置，Cary 60使用的光源为脉冲氙灯，代替了传统的可见光钨灯和紫外光氘灯两个光源
单色器：将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束，它是分光光度计的心脏部分
样品池：又称比色皿，盛放试液进行吸光度测量，其底及两侧为毛玻璃，另两面为光学透光面，为减少光的反射损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。常用的吸收池有石英吸收池（紫外光区）、玻璃吸收池（可见光区）
检测器：是将光信号转变为电信号的装置，测量吸光度时，并非直接测量透过吸收池的光强度，而是将光强度转换为电流信号进行测试，这种光电转换器件称为检测器
信号显示系统：是将检测器输出的信号放大，并显示出来的装置
仪器安装
4.1 安装Cary 60硬件
(1) 插入USB电缆，连接电源
打开计算机（如果未打开）
打开Cary 60（仪器电源按钮），并等待2min，直到校准完成
关闭并重新启动计算机
4.2 注册和验证Cary 60
(1) 双击计算机桌面上的Cary WinUV 图标
双击“Validate”（验证）应用程序，将出现“Agilent Software Registration”（Agilent 软件注册）对话框，单击Next（下一步）并按照说明操作（注意产品密钥可在CD盒上找到）
单击“Product Details”（产品详细信息）对话框的“Instrument Model”（仪器型号）旁边的 Add（添加）
从“Instrument Type”（仪器类型）下拉框中选择 Cary
选择“Model Name”（型号名称）
输入 Cary 60 序列号（仪器外壳标签上）
在“Accessories”（附件）部分中，对订购的所有附件重复步骤 3-6
单击 Next（下一步）并按照说明完成注册
出现“Validate”（验证）应用程序时，单击 Start（启动）
4.3 Cary WinUV 软件包中常用功能
Concentration：浓度测定
Scan：波长扫描
Validate：性能验证
Align: 仪器调整
仪器操作
5.1开机
a、接通电源，保证样品室内是空的，打开仪器开关，开关的黄灯闪烁，仪器自检完成停止闪烁，仪器预热30min。
b、打开联机电脑，进入桌面，双击“Cary WinUV”图标。
5.2新建浓度测定方法-Concentration
(1) 在Cary WinUV 文件夹下双击“Concentration”图标，进入浓度测定菜单。
(2) 单击Setup“设置”功能键，进入参数设置页面，按Cary →标样Standards→样品Samples→附件1Accessories1→附件2Accessories2→进样器Samplers→报告Reports→自动存储Auto store顺序,设置好每页的参数。然后按OK回到浓度主菜单。
(3) 单击View菜单，选择好需要显示的内容。基本选项为 Toolber；buttons；Graphics；Report。
(4) 单击Zero“调零”，放空白到样品室内，按OK“确定”键。
(5) 单击Start“开始”，出现标准／样品选择页。
Solutions Available（现有的溶液）。此左框中的标准或样品为不需要重新测量的内容。
Selected for Analysis（选择需要分析的标准和样品）。此右框的内容为准备分析的标准和样品。
按OK进入分析测试。放标准1然后按OK键进行读数。放标准2按OK进行读数，直到全部标准读完。放样品1按OK开始读样品，直到样品测完。
为了保存标准曲线在方法中，可在测完标准后，将设置—标样中将运行时进行曲线校正的勾去掉，不选择样品而由 File 文件菜单中方法另存为，保存此编好的方法，以后调用此方法时标准曲线一起调出。
如要存储数据和结果，单击“文件”，选“数据另存为”进行保存。
5.3 运行已保存的浓度测定方法
(1) 单击File→单击Open Method…→选调用方法名→单击Open。
(2) 单击Start开始运行调用的方法。如用己存的标准曲线，在右框中将全部标准移到左框。按OK→进入样品测试。
(3) 按提示完成全部样品的测试。
(4) 按提示保存数据和结果，输入数据文件名，单击保存，全部操作完成。
5.4 新建扫描吸收方法及样品测定-Scan
(1) 在Cary WinUV 文件夹下双击“Scan”图标，进入“San-在线”状态。
(2) 在该程序下点击“设置”，“Cary”中选择合适的波长、扫描速度等参数，点击“基线”中选择“基线矫正”。设置好后，按“确定”返回。
(3) 打开主机盖板，放入参比溶液，点击“基线”。
(4) 将比色皿取出换成待测溶液，点击“开始”按钮。系统提示设置相应的文件及样品名后，点击“确定”开始扫描。放入下一个样品，设置样品名，继续测试。
(5) 样品全部测完后，点击“完成”。点击“文件”中“数据名存为”保存数据。
5.5 仪器性能验证-Validate
(1) 开启仪器电源，使其预热至少30min
(2) 打开Cary Win UV 软件的“验证”应用程序
单击“Test”（测试）按钮
选择“Instrument Performance Tests”（仪器性能测试），然后选择
单击“Start”（开始）
确认光源没有任何遮挡，且样品室盖已关闭。选择
各项指标测试将开始执行。测试完成后您就能够在屏幕上看到结果报告，将测试结果保存为批处理文件。
5.6 氙灯能量检查及调整-Align
(1) 在Cary WinUV主窗口中双击Align，进入仪器调整控制程序页面
(2) 灯能量检查及调整：
点击Graph转换到信号页，在该页面可见是透过率信号的变化情况。
5.7 关机
(1) 测试完成后，关闭仪器，取出比色皿，洗净，关上主机盖板。
(2) 关闭电脑，总电源。盖好仪器防尘罩并登记使用情况。
注意事项及典型故障
6.1 日常使用注意事项
(1) Cary 60分光光度计的外表面应保持清洁，所有的清洁工作都应使用软布完成。如有必要，可以将软布蘸上水或温和的清洁剂。请勿使用有机溶剂或研磨性清洁剂。
(2) 样品室的洁净必须保持，必须将比色皿外壁留有的残液用擦镜纸吸干后方可放入仪器进行测定，否则会产生测量误差。
(3) Cary 60一次只能有一个Cary应用程序与仪器进行通信。如果要更改为另一个应用程序，则可以按“Connect”（连接）按钮使该应用程序进行联机。
(4) Cary 60分光光度计包含强烈的光源。直接对视光源会伤害到眼睛。操作员和其他未经授权的人员不得取下主盖板。
(5) 腐蚀玻璃溶液,不得长期盛放在比色皿，比色皿不能放在火焰或电炉上加热或干燥箱内烘烤。
(6) 仪器长时间不使用，请定期开机预热驱潮，一般一个星期开两次，每次半个小时为宜。
(7) 在测量时如对比色皿有怀疑,可自行检测，比色皿需配套使用。
比色皿盛装溶液至比色皿2/3处，使用后,立即用水冲洗干净。必要时可用1∶1的盐酸浸泡,然后用水冲洗干净。
6.2 典型故障
(1) 闪烁的红色 LED
可能原因：仪器正在扫描，但先前的初始化或校准失败
解决措施：
样品仓中的物品挡住了光束
比色皿没有正确插入且干净
重新启动Cary 60
氙灯不亮
可能原因：氙灯寿命到期或电路故障
解决措施：
检查灯丝电压、阳极电压是否正常，观察灯丝是否断开或有发红现象，如有需更换氙灯
扫描期间吸光度为10Abs且波动剧烈，如下图
解决措施：
Cary 60样品仓内的检测器电缆为连接，请检查样品箱左侧的8针插头是否正确插入
样品仓是空的
样品仓的光速没有被遮挡
基线扫描或样品扫描时，基线或信号有一个大的负峰
可能原因：扫描速度设置过快，信号在读取时误将滤光片或光源镜的切换当作信号读取了
解决措施：
可改变扫描速度
发布时间：2022-04-24 10:19
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TU-1810SPC紫外/可见分光光度计使用心得十月TU-1810SPC紫外可见分光光度计是北京普析通用仪器有限责任公司生产的产品，可独立完成光度测量、定量测定、光谱扫描、时间扫描、DNA/蛋白质测量及三维图谱分析等功能，其波长范围为190-1100 nm，光谱带宽：0.5、1、2、5 nm（四档可变狭缝），波长准确度：±0.3 nm，光度范围：-0.3～3.0Abs，光度准确度：±0.002 Abs（0～0.5 Abs），该款分光光度计具有出色的技术指标及稳定可靠的工作特性，流畅的人机对话操作（测定结果稳定可靠，操作简便），可满足用户各种分析工作的需求诸如光度测量、光谱扫描、时间扫描及三维图谱分析等，且售后服务良好，深受广大分析工作者的喜爱，在基层实验室有广泛的装备应用。本实验室在2005年装备了该款分光光度计，主要用于光度测量、定量测定、光谱扫描、时间扫描，现就光谱扫描、时间扫描应用情况谈几点体会。光谱扫描:主要是为了测量某物质的吸收光谱曲线以获得该物质的最大吸收波长(λmax)，这对于没有光谱扫描功能的光度计而言则是比较麻烦且费时的，特别是对于稳定性较差的物质要想获得准确的λmax还是比较困难的，但对于有光谱扫描功能的光度计而是非常容易的，所以应用好仪器的光谱扫描功能，可以很方便测定出某物质的吸收光谱曲线，而后通过峰值检出来确定该物质的λmax并用于该物质的光度测定。进行光谱扫描时，首先是要确定扫描的波长范围即起始和终止波长，一般可根据待扫描物质的性质如颜色等大致确定其λmax，如红色物质其λmax位于500 nm左右，那么其光谱扫描的波长范围可选择400～600 nm，例如：盐酸氯丙嗪可氧化成红色化合物，经对350～600 nm波长范围扫描确定其λmax位于525 nm波长处，试剂空白的λmax位于360 nm波长处，见图1。图1 盐酸氯丙嗪氧化产物扫描光谱图而对于蓝色物质其λmax位于600 nm左右，那么其光谱扫描的波长范围可选择500～700 nm，例如：蓝色的铁（Ⅱ）-硫代紫尿酸配合物，经对300～800 nm波长范围扫描确定其具有两个吸收峰分别位于658 nm和384nm波长处，图2。具体扫描时先可以选择一个大致的波长范围进行扫描，再根据情况进行适当调整，以便获得合适的扫描光谱图。图2 铁（Ⅱ）-硫代紫尿酸配合物扫描光谱图其次是要确定合适的扫描波长间隔，可根据不同的精度要求选择不同的扫描波长间隔，对λmax数据精度要求较高时可选择较小的扫描波长间隔如0.2nm，反之可选择较大的扫描波长间隔如0.5nm或者1nm甚至更大。总之要选择合适的扫描波长间隔以获得准确的λmax数据。第三是要确定适宜的扫描速度，对于稳定性好的物质可采用慢速和中速扫描，反之对于稳定性差的物质可采用快速扫描，这样可获得准确的光谱曲线及λmax数据。第四是要确定适宜的吸光度范围（扫描光谱图纵坐标）范围，以便显示扫描光谱图的全貌。如图1、图2的吸光度范围分别为0～3.5和0～2.0，对于有负吸光度的可以从负数开始，一切以能显示扫描光谱图的全貌为目的。2、时间扫描：一是为了监测某化学反应的吸光度随时间变化的曲线以获得该化学反应达到的最大反应速率（吸收度）的时间。该功能特别适用于动力学光度法中反应平台区的确定。二是可以观察某物质吸光度随时间变化的曲线，以监测该物质的稳定性。如CN-与异烟酸-硫代巴比妥酸反应首先形成红色染料，然后逐渐变成蓝色，其吸光度A525先是快速上升达到稳定最大值然后很快下降，而A642上升及下降的速度均较缓慢，但室温下体系在525nm和642nm吸光度分别在2min和35min左右可达最大值且分别在2～3min和15～20min内基本稳定，见图3。图3 CN--异烟酸-硫代巴比妥酸体系在525 nm（0～20min）和642nm（0～60min）处的时间吸收曲线时间扫描时先要确定扫描波长即光度测量波长，一般为物质的最大吸收波长；其次要确定扫描时长，以获得化学反应的吸光度随时间变化的趋势，或物质吸光度随时间变化的趋势，以提示物质的稳定性数据。
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紫外可-见分光光度计 使用心得
紫外可-见分光光度计使用心得TU-1950紫外可-见分光光度计是实验室常规分析仪器，操作简单，性能还是比较稳定的。我们中心2017年购置，到现在6年了，一直没有出现故障，可是最近突然出现了问题。一开始是做熟肉中亚硝酸盐时平行样品和加标回收都不好，平行样品实测差超过20%，回收率只做到72%，之前平行样品实测差一般都在5%以内，回收率在90%以上。但标准曲线线性还可以。接连复查了两次，结果都不太好。一直以为是实验过程中操作有问题，根本没有怀疑仪器出现故障。恰恰此时，接到省职防院水溶液中氨的质控考核样品，使用纳氏试剂分光光度法测定。加完试剂显色稳定后进行比色，在调零时发现调零后示值不稳定，会从0.000跳到0.001或0.002，比色池盖子掀起来和盖下去示值相差比较大，同一样品比色完毕接着重复比色示值相差也比较大，标准曲线低浓度比色示值甚至跳管，较高浓度的吸光值反而低。我们怕环境湿度大对仪器有影响（之前的岛津紫外出现过湿度大无法开机现象），又持续开机预热，除了开着空调除湿，还开了除湿机，又反复试了几次，仪器校准能顺利通过，但仪器示值依然不稳。这才确定是仪器出了问题。咨询工程师，怀疑是滤光片雾化。工程师过来后，先排除了氘灯和钨灯的问题，又做了波长校正和暗电流校正，打开仪器查看滤光片，有些许雾化，不影响使用。工程师忙了整整一个上午，对仪器进行了深度的维护，再测试，发现仪器示值稳定了。通过这次紫外可-见分光光度计故障的排除，我们得到了很多启示，在仪器使用过程中一定要注意维护以延长其使用使用寿命。在TU-1950紫外可-见分光光度计使用过程中一定要注意的问题：1、 仪器每次使用完毕需要认真用棉签或棉球擦拭干净比色池和比色架，保持比色系统洁净无尘无污染；2、 使用完擦拭干净的比色池旁边放一小包用纱布包着的硅胶防潮；3、 每次比色完毕后拿出比色皿，把波长调至660nm，使螺杆归位后再关机；4、 每半年或一年做一次波长校正和暗电流校正，波长校正时比色池不放比色皿，暗电流校正时样品路要放遮光皿。 这是我在使用TU-1950紫外可-见分光光度计的一些心得，大家有什么不同看法或好的建议，我们可以交流讨论。
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耶拿紫外可见光分光光度计 PLUS使用心得
【仪器心得】耶拿紫外可见光分光光度计 PLUS使用心得 1. 关于耶拿紫外可见光分光光度计 PLUS的使用经验：这台紫外的光源是可见光区用白炽光源，用的是钨丝灯设备的开机运行预热。启动计算机，进入 windows 操作系统。 点击桌面上的 winaspect 图标，启动软件系统。 执行 measurement 里面的 initialize 进行初始化设备，此时氙灯亮。 等待 20 分钟进行光源和设备的预热。 执行 measurement 里面的 set parameters 进行参数的设定 执行 measurement 中的 standard correction 进行标准校正，此时光度计上面两个 mount 上必须没有任何样品。 参比样品装入及测量 测定 A+B 时，在两个比色皿中装入 B。 两个比色皿固定在 mount 上，毛玻璃被卡住。 执行 measurement 中的 regerence measurement 进行参比样品测量，没有实际结果，实际是一个校 正的过程。 实际样品装入以及测量 里面的参比样品不能动，将外面的参比样换成待测样品 洗干净外面的比色皿，装上 A+B。 将样品比色皿固定到 mount 上。大家使用时候一定要注意比色皿只能接触毛玻璃侧面。 2.仪器的优点和不足我们现在用的18槽的产品，也就是可以更换18个点位的，样品可以同时检测或者逐个检测。这个套设备价格大概16W左右。但是操作很方便。在耗材方面厂家给带了比色皿只有一个，这里不建议大家买原厂家的，价格贵而且没什么意义。国产完全可以代替。 3.总结在波长设计上面，符合所有药典和食品国标的光谱带宽：0.2、0.5、1、2 和 4 nm，五档可调，PC控制，数据处理方面，可设置数据报告形式波长范围：185-1100nm。这个波长应用没有任何问题。
