Western Blot结果出乎意料，有可能是转印海绵垫惹的祸

您上一次何时更换的转印海绵垫？答案可能是“从不”。因为如果转印有效，为什么要更换？只有当海绵变成灰色和块状时，才会想起来更换。 但是具有多年Western Blot经验的Azure技术专家对定期更换转印海绵垫给出了必要性的解释，我们来具体看一看： ★ 为什么更换海绵垫很重要？★ 转印问题的常见根源是三明治结构的松紧度。三明治结构一定要紧！请定期更换转印海绵垫，以确保实验结果的准确性。使用额外的滤纸来填补海绵的磨损，可能会导致传输不一致。 我们都会定期更换海绵垫，因为它们会吸收污染物，随着时间的推移，转印海绵垫也会被污染。使用干净的海绵垫对荧光应用尤为关键，因为这些污染物会产生自发荧光，从而导致高背景。

Western blot除了化学发光检测，还有更优秀的近红外荧光检测方法

在介绍近红外荧光凝胶成像凝胶成像检测方法之前，我们来回顾下化学发光的历史：WB是目前蛋白检测的主要方法之一，1981年由尼尔·伯奈特（Neal Burnette）所著的《分析生物化学》中首次被提出，一直延续至今，仍有很多忠实的粉丝。

万水千山总是情，全新Azure总蛋白定量肯定行

目前，多个主流期刊和免疫印迹专家提出了看家基因已经不适合作为内参使用了。因为大多数看家基因都是高丰度蛋白，其产生的信号大多都会接近线性动态范围的上限，当我们在检测低丰度蛋白的时候，往往蛋白的上样量会很大，易造成信号过饱和，这时候常见的内参产生的信号已经不能正确反应上样量的差异了。并且研究发现一些看家基因的表达并不是恒定的，它会随着发育阶段的不同等因素产生变化，所以使用看家基因的定量并不可靠。

让蛋白质磷酸化清晰可见

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候，会特别沮丧。Azure君在此给大家列出几点小建议，希望能帮助您改善一下实验结果。 1、样本是否表达： 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置： 阳性和阴性对照。 总蛋白抗体对照，对于特定时间的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中， 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。 3、内参设置： 根据实验选择合适的内参，如Actin、GAPDH 等