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订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
NP40裂解液（带抑制剂） | ZY-61L054 | 100 mL | 218 |
产品描述
NP40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液，主要成分为50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制。对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于常规的Western、IP和co-IP等实验蛋白样品的制备。
产品组分
产品编号 | 产品组成 | 包装规格 |
AP01L054 | NP40裂解液 | 100 mL |
磷酸酶抑制剂 | 1 mL | |
PMSF | 1 mL | |
产品说明书 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。
使用方法
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。具体NP-40裂解液的使用量参照表1。
(3) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
(3) 按照每20 mg组织加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项
1. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。
2. 通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
3. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。
然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
表1; NP-40裂解液的使用量
样品种类 | 样品来源 | 收获细胞数 | RIPA用量 | 可制备样品数 |
细胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
60 mm培养板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
90 mm培养板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
25 cm2培养瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
75 cm2培养瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
组织 | 20 mg组织块 | 150-250 μL | 400-600 |
特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
