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获取电话即用型易错PCR试剂盒
英文名称：Instant Error-prone PCR Kit
运输：低温
保存：负20℃
有效期：1年
货期：1-2天
其他：
产品介绍：
制突变PCR
产品及特点
易错 PCR（error-prone PCR）是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能
的特性，在一定条件下（如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在）能够按较高的机
率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下：
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发，本产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66%（±
0.13%），详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在 PCR 引物中设计位点，则可使产物克隆到表
达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错 PCR 的
产物用作下一次易错 PCR 的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有
益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物，对于 1kb 以上的产物，建议分段扩增。
6. 本产品足够 100 次 30uL 体系的易错 PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。
运输及保存 低温运输，-20℃保存, 有效期为一年。
自备试剂 引物、DNA 模板、超纯水。
使用方法 1. 将自备的 PCR 引物稀释到 10uM。引物也是决定易错 PCR 成败的关键因素，设计
引物时要保证其 Tm 在 70℃，长度在 25-30nt 之间，GC 含量在 45%-60%之间，
3 端 GC 含量低，并且没有发夹结构。
用自备引物和常规 PCR 试剂扩增制备易错 DNA 模板（常规 PCR 产物），胶回收并
准确确定浓度。注意：易错 PCR 的模板一定要用胶回收的常规 PCR 产物，因为胶回
收会可以把电泳不可见的非特异性扩增片段去除，否则这些片段由于也是用易错
PCR 引物扩增所得，在易错 PCR 扩增时也会被扩增，产生竞争抑制，降低靶分子的
扩增效率。如果常规 PCR 制备模板的引物和易错 PCR 引物不同（类似巢式 PCR）
则可以避免此问题，但需要合成两对引物。本试剂盒只适用于扩增 1kb 以下的产物，
对于 1kb 以上的产物，建议分段扩增。
2. 将回收的 DNA 片段（模板）稀释到 1ng/uL 、10ng/uL 和 100ng/uL 三个浓度。
注意：模板使用量是影响突变率的最重要因素，模板 DNA 为非突变 DNA，扩增产生
的 DNA 为突变 DNA，易错 PCR 体系最终 DNA 量是基本固定的，因此模板 DNA
使用量越大，则突变 DNA 在终产物中的相对比例就越低，突变率就越低。反之亦然。
但模板太少又不容易扩增成功，所以建议同时测试三个模板用量。如果都成功，则优
先选用模板浓度低的 PCR 产物进行分析。
3. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比
例增加或减少。
4. 按用户已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下
表），然后取 10uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的
PCR 条件(注意：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理)：
步骤 参数 循环数
PCR 前变性 94℃ 3 分钟 循环 1 次
易错 PCR
94℃ 1 分钟
45℃ 1 分钟 循环 30-60 次
72℃ 1 分钟
注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在易错 PCR 结束后做延伸处理。易错 PCR
循环次数越多，突变 DNA（扩增产物）与非突变 DNA（原始模板）的比例就越高。此外
在突变率和模板长度恒定的情况下，扩增次数越多，发生突变的数就越高，在同一模
板上发生的突变位点数就越多，所以如果需要，可以做 30、35、40、45、50、55、60
次 7 个循环数的比较。
5. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。如果没有，可以调整模板用量和 PCR 参数。
6. 胶回收易错 PCR 扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增
加突变率，可以以突变后的 DNA 为模板，进行下一轮易错 PCR。
