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IFNα试剂盒;猴干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒
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品牌:TSZ
英文名称:IFNα试剂盒
型号规格:96T/48T
更新时间:2020/5/29 13:54:52

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一、 IFNα试剂盒;猴干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒说明

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗IFNα单抗包被于酶标板上,标准品与样品中的IFNα与单抗结合,加入生物素化的抗IFNα抗体,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,IFNα浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中IFNα浓度。

  

二、IFNα试剂盒;猴干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒组份

组份

48T

96T

酶标板(已包被抗IFNα)

48

96

样品稀释液

5 mL

5mL

第一抗体工作液

2.7ml

5.5ml

酶标抗体工作液

5.5ml

10.5ml

底物液

1

2

终止液

3ml

6ml

洗涤液(20×)

25 mL

50 mL

标准品(冻干粉,2000pg/ml

1

2

坐标纸

1

1

封板纸

1

1

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

1、标准品液配制:使用前每管中加入蒸馏水 400ul 溶解后即可。

2、洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释。

四、IFNα试剂盒;猴干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒使用注意事项

1. 以上标准孔及待查样品均建议做复孔,每次测定应同时制作标准曲线。

2. 底物液使用前建议先行检查,若溶液颜色发蓝则已失效,弃去。

3. 本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用,溶液应轻轻摇匀后使用。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,这属于正常现象,加热使结晶完全溶解后再配制。

4. 本试剂盒含 2M 硫酸,不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。

5. 板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。

6. 不同批号的试剂盒组分不能混用。

7. 正确拿酶标板:不要接触板的底部,否则会影响度数。

五、操作方法

1. 实验前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温(20-25℃);

2. 取出所需数量的板条,其余密封放回 4℃;

3. 建立标准曲线:设标准孔 8 孔,每孔中各加入样品稀释液 100ul,第一孔加标准品 100nl,混匀后用加样器吸出 100ul,移至第二孔。如此反复对倍稀释至第七孔,最后,从第七孔中吸出 100ul 弃去,使之体积均为 100ul。第八孔为空白对照;

4. 加样:待测品孔中每孔加入待测样品 100ul

5. 将反应板置 37120 分钟;

6. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干;

7. 每孔中加入第一抗体工作液 50ul;

8. 将反应板充分混匀后置 3760 分钟。

9. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干;

10. 每孔加酶标抗体工作液 100uL. 11. 将反应板置 3760 分钟。

12. 洗板:同前。

13. 每孔加入底物液 100uL,置 37℃暗处反应 5-10 分钟。

14. 每孔加入 50uL 终止液混匀。

15. 450nm 处测吸光值。(应尽快,时间过长可能导致本底偏高)

结果计算与判断:

1.所有 OD 值都应减除空白值后再计算;

2.以标准品 100050025012562.531.2515.620pg/ml OD 值在半对数纸上作图,画出标准曲线,将浓度作为 X 轴(对数轴),OD 值作为 Y 轴(线性轴)。曲线应为一光滑曲线。

3.根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应IFNα含量。

六、IFNα试剂盒;猴干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒样品的准备和保存

样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

1、血清:用干净试管收集血液,室温凝固 30 分钟,离心 1000×g15 分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

2、血浆:采用 EDTA 抗凝,抽血后 30 分钟内离心 1000×g15 分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

3、细胞培养、组织匀浆、体液:离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

七、性能参数

产品名称:猴干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒

简称:IFNα试剂盒

规格:96T/48T

检测范围:15.625-1000pg/mL

检测限:5.3pg/mL

重复性:板内变异系数<10%

板间变异系数<15%

 


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