常见的核酸提取方法有沉淀法、离心柱法和磁珠法,提取步骤基本分为裂解、洗涤和洗脱,这其中需要注意的细节很多,一处出错都容易导致失败。
在核酸提取过程中,常见的问题主要有产物得率低、产物降解或试剂残留。针对这些问题,下文整理了具体的应对方法,希望能帮大家避坑。
壹
提取的核酸得率低
☛ 样品量与试剂的配比要控制在一定范围,避免超过裂解能力;
☛ 破碎研磨的步骤处理细节很重要,一定要充分研磨,这是核酸提取的首要条件;
☛ 在洗脱的步骤,使用足量的洗脱液洗脱并充分混匀,避免有团块残存;
☛ 实验耗材要匹配,如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同,也会影响核酸的得率。
贰
提取核酸出现降解
☛ 提取的样品量要符合试剂的配比,尽量控制样品量达到合适比例;
☛ 每个步骤都要注意充分的混合均匀,避免团块的残留影响实验结果;
☛ 在洗脱时,时间过长或者温度过高,核酸有可能会降解;
☛ 样本切记不可反复冻融,提取的样本要注意在合适的温度保存,长期保存尽量-80 ℃。
叁
提取到的核酸纯度不够高,甚至抑制物残留影响下游实验
☛ 样本量和裂解液等试剂的配比要尽量控制到合适的范围;
☛ 混合均匀以确保裂解充分和没有团块残留;
☛ 晾干的步骤要充分,否则可能会导致醇类等杂质的残留;
☛ 磁棒振荡幅度太小或混合时间太短,磁珠上有杂质残留会影响磁珠吸附核酸的能力。
[来源:深圳逗点生物技术有限公司]
AIculture慧养® | 助力微生物检测更高效准确的解决方案来啦!
2023.08.15
好物助研 | 想要养好细胞,你需要@biocomma®细胞培养基!
2023.07.14
不负期待 | 2023慕尼黑上海分析生化展圆满落幕,快跟着逗点一起来回顾!
2023.07.14
2023.07.06
上新啦!逗点生物前处理设备再添“加速器”,每分钟可达2500转!
2023.06.25
“内蕴深厚·小而不凡” | BP96A全自动移液工作站全新上市!
2022.07.26
版权与免责声明:
① 凡本网注明"来源:仪器信息网"的所有作品,版权均属于仪器信息网,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用。已获本网授权的作品,应在授权范围内使用,并注明"来源:仪器信息网"。违者本网将追究相关法律责任。
② 本网凡注明"来源:xxx(非本网)"的作品,均转载自其它媒体,转载目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,且不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。
③ 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为默认仪器信息网有权转载。
谢谢您的赞赏,您的鼓励是我前进的动力~
打赏失败了~
评论成功+4积分
评论成功,积分获取达到限制
投票成功~
投票失败了~