You Only Live Once|细胞领域投稿:liuld@instrument.com.cn
PCR
近年来,我国分子诊断市场规模保持快速增长趋势,PCR技术是目前相对成熟且临床应用相对广泛的分子诊断技术,占整体分子诊断市场的50%以上。随着第三代PCR技术(数字PCR技术)的迅速发展,PCR技术整体市场占有率有望进一步提高。
目前PCR试剂盒开发主要采用TaqMan探针法(突变位点位于TaqMan探针上)和ARMS法(突变位点位于引物3’端),二者瑜亮之争,各有长短。TaqMan探针法具有成熟度高、特异性高等优点,但探针设计难度较大、背景信号较高,而低背景/高特异性的MGB-TaqMan探针更加昂贵,在超多重PCR体系开发方面效率和难度都较高。ARMS方法具有检测灵敏度更高、可检测低至0.5%的突变,且体系设计与优化成本更低等特点。
尽管ARMS PCR技术具有显著的优点,但设计出稳定且特异性很高的ARMS检测体系仍然相当挑战。
第一代ARMS PCR技术为了提高突变检测的特异性,需要在引物3’端额外引入多个碱基错配(引物设计难度较大),从而保证检测的特异性。
第二代ARMS PCR技术为了提高突变检测的特异性,Super-ARMS采用独特的专利技术将引物设计为环化引物,并且在3’端引入错配碱基,但Super-ARMS技术引物设计仍然相对复杂,不易大规模普及使用。
为了降低ARMS PCR技术引物设计的难度,并进一步提高ARMS PCR技术的特异性,上海小海龟科技有限公司近日推出第三代ARMS PCR技术,即Perfect-ARMS技术,该技术不需要设计环化引物、使用创新的超高特异性神甄™(Single Nucleotide Ultra Precision Polymerase, SNUPP )DNA聚合酶,可以准确识别引物3’端单碱基错配,只需要在引物3’端设计一个识别碱基,即可以实现高度特异性的ARMS检测。Perfect-ARMS技术变革性地降低了ARMS试剂盒开发难度,让PCR试剂盒开发更“简捷”、效率更高、成本更低。同时,Perfect-ARMS技术既适用于荧光PCR平台,又适用于数字PCR平台。
图1. ARMS PCR技术路线图
Perfect-ARMS PCR实验案例展示
图2. Perfect-ARMS在qPCR检测中的应用案例展示
图3. Perfect-ARMS在数字PCR检测中的应用案例展示
关于上海小海龟科技
上海小海龟科技有限公司是一家立足于基因检测上游仪器、芯片耗材开发的高新技术企业,2022年获得中国首张数字PCR计量评价证书,2016年获批国家发改委“基因检测技术应用示范中心”,先后承担多项上海市生物医药领域科技支撑专项和科技部“科技助力经济2020”专项,推出多款数字PCR系统并取得医疗器械注册证书,并基于此系统开发完成约40款检测试剂盒,包括肿瘤伴随诊断、肿瘤早筛、优生优育、病毒检测等。
[来源:小海龟科技]
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