pRS424酿酒酵母质粒

pRS424酿酒酵母质粒

基本信息

启动子: TRP1，T3,T7

复制子: 2μ ori,ori,FI ori

质粒分类: 酵母系列，酿酒酵母表达载体

质粒大小: 5616bp

原核抗性: Amp

筛选标记: TRP1

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 酵母细胞

诱导方式: 半乳糖诱导

5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG

3'测序引物: 根据序列设计引物

质粒简介

    Restriction digests of the clone give the following sizes (kb): BamHI--5.6; EcoRI--5.6; PvuII--5.2, 0.5; XbaI--3.3, 1.4, 1.0.Contains the REP3 and FRT sequences necessary for high copy propagation in yeast.In S. cerevisiae, the number is about 20 per haploid cell. In non-selective growth, plasmids are lost through mitotic segregation at rates in the range of 1.5 + or - 1.7% of progeny per doubling.YE-type shuttle vector encoding the beta-galactosidase alpha peptide, permitting blue-white visual detection. Can be used to produce ssDNA. Contains promoters for in vitro RNA synthesis and priming sites useful for sequencing.The order of the major features in this plasmid is: ori(f1) - lacZ - T7 promoter - MCS (KpnI-SacI) - T3 promoter - lacI - ori(pMB1) - ampR - ori(2 micron) - TRP1.

质粒图谱

pRS424酿酒酵母质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pRS424酿酒酵母质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。