利用安捷伦 Seahorse XF成像和归一化系统对XF数据进行归一化

归一化验证

RAW264.7、HT29 和 SKOV3 细胞在补充了 10% FBS (HyClone,

SH30070.03)、2 mmol/L L-谷氨酰胺 (Corning, 25-005-CI) 和

1 mmol/L 丙酮酸钠 (Corning, 25-000-CI) 的高浓度葡萄糖

DMEM (Gibco, 11960-44) 基础生长培养基中培养。将 A549 细

胞在补充了 10% FBS 和 2 mmol/L GlutaMAX (Gibco, 35050-

061) 的 DMEM:F12 (Corning, 10-090-CV) 基础生长培养基中

培养。将 MCF7 细胞在含有 10% FBS 和 1 mmol/L 丙酮酸钠

的 RPMI-1640 (Gibco, 21870) 中培养。将 HepG2 细胞在补充

了 10% FBS、2 mmol/L GlutaMAX 和 1 mmol/L 丙酮酸的低

浓度葡萄糖 DMEM (Gibco, 11885-084) 中培养。对于 XF96，

以五种不同细胞密度接种细胞，其涵盖范围为建议细胞密度的

±50%；HepG2 为 1 × 104 个细胞/孔，A549、HT29、MCF7 和

SKOV3 为 2 × 104 个细胞/孔，RAW264.7 为 3 × 104 个细胞/

孔。对于 XF24，以三种不同细胞密度接种细胞，涵盖范围为

±25%；HepG2 为 2 × 104 个细胞/孔，A549 和 MCF7 为 4 ×

104 个细胞/孔。

将细胞培养过夜，按照标准安捷伦 Seahorse XF 细胞能量代谢

表型测试方案1 测量代谢表型，其中对方案作出以下修改：将

20 μmol/L Hoechst 33342 (Thermo, 62249) 加入寡霉素/FCCP

混合物中。通过 BioTek Cytation 1/5 使用 XF 细胞成像和计数

软件2 对细胞计数，在 Wave 软件中将数据归一化。使用安捷

伦 Seahorse XF 细胞能量代谢表型报告生成器比较归一化后的

数据变化3。

使用不含酚红的安捷伦 Seahorse XF 基础培养基（安捷伦科

技公司，103335-100）中的细胞进行所有 XF 分析，该培养基

补充了 10 mmol/L 葡萄糖、2 mmol/L L-谷氨酰胺、1 mmol/L

丙酮酸钠和 5 mmol/L HEPES，pH 7.4（安捷伦科技公司，

103337-100）。