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naica®数字PCR系统助力霍乱弧菌复制关键基因定量检测并验证猜想
2022-04-28 15:06
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Naica™ Crystal微滴芯片数字PCR仪
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多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪，则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候，不应墨守成规，要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化，达到最佳扩增效果。
qPCR实验的工作流程首先需要确定研究的目的，根据实验设计规划好实验分组、重复次数等细节。接下来分为样本准备和引物探针验证两个重要的步骤。样本准备主要是核酸提取逆转录等步骤，引物探针需要去测试特异性和效率。接下来需要使用qPCR仪来对样品中的目的核酸进行扩增qPCR结束后根据实验目的对目的核酸进行相对或者绝对定量。
荧光定量PCR技术是将常规的PCR和荧光检测技术相结合，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，以此实现对初始模板的定量分析。荧光定量PCR技术作为当今生物学研究的重要手段之一，在基础科学、生物技术、医学研究、法医学、诊断学等多方面具有广泛的应用前景。
本研究使用ECHO REVOLVE正倒置一体荧光显微镜（RVL-100-G，Discover ECHO，US）检测VS29蠕虫的GFP荧光。激发和检测波长分别为470–495 nm和510–550 nm。使用图像处理和分析软件对荧光图像进行分析，计算其平均荧光密度。
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