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原代细胞分离和培养基本操作步骤
原代细胞可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和
DNA，可转染绝大多数原代细胞。目前，无论国外还是国内，原代细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。原代细胞能够高效转染绝大多数原代细胞，获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫，也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞，RFect
PM 细胞转染阳性率都在 80%以上，而转染细胞死亡率不到 10%。
原代细胞分离和培养基本步骤
1、器官和组织的选择
尽可能的去除不必要的组织和血迹。
2、原代细胞的分离
（1）应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。
（2）根据组织来源不同，可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。
3、原代细胞的培养：
（1）PriCells原代细胞特制培养基
（2）PriCells原代细胞特制添加物
（3）优质胎牛血清
4、细胞的培养和鉴定：
PriCells原代细胞鉴定试剂盒
4、原代细胞的传代、保存
（1）传代：依椐细胞的生长状态，生长的细胞1：2或1：3进行传代。
（2）保存：DMSO＋培养液＋血清
按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃过夜）→液氮。
5、原代细胞的复苏
（1）取出细胞，迅速放入37℃温水中快速解冻。
（2）吸出细胞悬液，并加10倍以上培养液。
（3）用培养液适当稀释后接种培养瓶，放入37℃CO2培养箱静置培养。
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