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抗体结合试验分析

2021/04/26 12:26

阅读:352

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应用领域:
制药/生物制药
发布时间:
2021/04/26
检测样品:
预防类生物药品
检测项目:
理化性质
浏览次数:
352
下载次数:
参考标准:

方案摘要:

从原理来看,这类实验主要分为两类,一类是基于靶点特异性结合的抗体结合实验,这类方法主要研究抗体与靶点直接的特异性结合能力,研究方法分别有依赖于固相介质的ELISA,均相溶液中的靶点结合检测,以及细胞水平的流式分析;另一类是基于配体阻断结合的抗体结合实验,这类实验主要研究抗体与配体竞争结合受体的情况,通过比较抗体与配体结合受体的亲和力差异,来评价抗体与靶点的结合位点和结合能力。

产品配置单:

前处理设备

Wellwash和Wellwash Versa洗板机

型号: Wellwash,Wellwash Versa

产地: 上海

品牌: 赛默飞

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分析仪器

Multiskan SkyHigh 全波长酶标仪

型号: Multiskan SkyHigh

产地: 新加坡

品牌: Thermo Scientific

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赛默飞Attune NxT流式细胞仪

型号: Attune NxT

产地: 新加坡

品牌: Invitrogen

¥50万 - 100万

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Multiskan™ FC 酶标仪

型号: Multiskan™ FC

产地: 上海

品牌: 赛默飞

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方案详情:

首先,对于基于靶点特异性结合的抗体结合实验,最常用的是基于固相的间接ELISA和基于细胞水平的流式分析法,间接ELISA是利用酶标记的抗抗体来检测已与固相结合的受检抗体,该实验的成功关键点在于包被抗原的合理选择,封闭试剂的体系优化,检测二抗需要在保障高度特异性同时,避免种属cross反应,另外通过选择更灵敏的显色方法并使分析范围提高。


抗体结合实验分析—间接ELISA法Multiskan SkyHigh全波长酶标仪、Multiskan FC酶标仪Wellwash洗板机)

image.png


那么流式检测与间接ELISA的差异主要在于细胞水平上的抗原抗体结合具有空间结构的选择性,其成功的关键点在于合理选择天然或构建功能细胞株,更能有效模拟真实生理现象;除此之外,有效地流式操作流程和体系建立也至关重要,包括样品制备到buffer,功能试剂的选择,检测抗体的特异性,背景以及对照体系等等;比如,如果实验中我们的功能细胞株带有Fc受体,就需要加入Fc封闭试剂类的辅助试剂来降低背景,提高实验结果精确性。


抗体结合实验分析—流式法Attune NxT流式细胞仪)

 image.png


另外关于基于配体阻断结合的抗体结合实验,实验中经常会需要对其中一个组分,比如待测抗体或竞争配体进行生物素化或荧光等活性标记,从而获得可量化的高灵敏度信号来进行亲和力差异比较。


更多详情请点击“下载”按钮image.png


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