那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于液相分离法（三）：液相分离法是指将均匀液相或熔体通过某种机理分离成两种不同成份互不混溶的液相的方法，包括液相色谱法、多维液相分离等方法。碳纳米管的液相分离方法主要包括电泳法、密度梯度离心法、管壁修饰法、凝胶色谱法和萃取法等。碳纳米管液相分离碳纳米管是一种由二维石墨烯片层卷曲而形成的无缝管状结构，其液相分离方法主要包括电泳法、密度梯度离心法、管壁修饰法、凝胶色谱法和萃取法等。①电泳法金属性和半导体性碳纳米管的介电常数具有显著差异，金属性碳纳米管的介电常数远远大于半导体性碳纳米管，在不均匀的交流电场作用下，利用金属性与半导体性碳纳米管所受的电泳力大小的差异可以实现两者的分离。电泳分离的优点是可以同时获得高纯度的金属性和半导体性碳纳米管，但该方法实验操作繁琐，而且产量较低。②密度梯度离心密度梯度离心是一种分离细胞的常用方法。其原理是在离心管中加入惰性密度梯度介质，再加入样品溶液，样品在离心力的作用下分配到梯度中的特定位置，在密度梯度不同的区域形成区带.金属性和半导体性碳纳米管与表面活性剂的结合能力不同，在表面活性剂的溶液中，二者产生密度的差异，从而可以通过密度梯度离心实现分离。密度梯度离心法可以达到宏量分离的要求，但是碳纳米管需要经过超声分散、超速离心、分层抽取等过程，碳纳米管的损失较多，并且管壁上吸附的各类有机分子难以去除，影响碳纳米管的结构和性能。③管壁修饰法金属性和半导体性碳纳米管的化学反应活性不同。金属性碳纳米管由于在费米能级处的电子态密度高于半导体性碳纳米管，所以通常情况下，金属性碳纳米管的化学活性高于半导体性碳纳米管，可以和修饰分子优先反应。碳纳米管分散液在室温放置14d后，金属性碳纳米管沉降析出，半导体性碳纳米管则留在溶液中。共扼高分子修饰的碳纳米管不会产生结构上的改变，因此不会对其J陛质产生影响，特别是在电子器件领域，共扼体系分离碳纳米管具有很大的应用潜力，合适的修饰分子的选择是实现成功分离的关键。虽然可以达到宏量分离、原理和过程也比较简单，但是修饰分子的寻找以及化学修饰对碳纳米管结构和性质的影响是制约该方法发展的2个重要因素。④凝胶色谱法凝胶色谱法基于金属性和半导体性碳纳米管与凝胶的作用力不同，在碳纳米管溶液通过凝胶色谱柱的过程中，与凝胶作用力强的半导体性碳纳米管留在柱上，作用力弱的金属性碳纳米管留在溶液中，从而实现分离。影响凝胶色谱分离的主要因素有碳纳米管分散液浓度、表面活性剂类型及浓度、凝胶柱类型等.此方法分离效率高，可以宏量分离，同时分离过程不会对碳纳米管造成损伤。⑤萃取分离萃取分离是近年来兴起的一种分离单壁碳纳米管的新方法。它利用金属性和半导体性碳纳米管在两相溶液体系里分布系数的差异来实现二者的分离。萃取分离过程操作简单，用时少且容易实现宏量分离，这种简单、快捷、低成本的方法为单壁碳纳米管的分离提供了新途径。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于液相分离法（三）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于液相分离法（二）：液相分离法是指将均匀液相或熔体通过某种机理分离成两种不同成份互不混溶的液相的方法，包括液相色谱法、多维液相分离等方法。碳纳米管的液相分离方法主要包括电泳法、密度梯度离心法、管壁修饰法、凝胶色谱法和萃取法等。多维液相分离1987年，Giddin指出，多维联用系统的总分辨率约等于各维分辨率平方和的平方根，总峰容量约等于各维峰容量的乘积。根据这一理论，多维分离系统可以减少峰重叠9.10，提高系统的分辨率和峰容量，为样品的定性提高更多的数据信息。此外，它还具有分离速度快、重现性好、’白动化程度高的优点。因此，发展多维液相分离技术对于蛋白质组学的研究至关重要。多维液相分离系统大致可以分为两大类：离线联用和在线联用。离线联用是指收集**维的每个组分峰，然后分别引入第*二维进一步分离。采用在线联用的方法，**维的洗脱液携带已初步分离的组分直接进人第*二维进行再次分离。后者与前者相比，样品不会损失、速度更快、自动化程度更高，是研究的热点，也是本文介绍的重点。多维液相分离系统，尤其是采用在线连接的方式，为达到*大的分离效率，必须满足以下两点标准名：1）理想情况下，各维应具有完全正交的分离机制；2）高维的分离速度应该快于低维的分离速度，从而可以避免已经分开组分在高维分离中重新混合。常见的多维液相分离系统主要可以分为二维液相色谱、二维液相色谱一毛细管电泳和二维毛细管电泳三大类。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于液相分离法（二）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于液相分离法（一）：液相分离法是指将均匀液相或熔体通过某种机理分离成两种不同成份互不混溶的液相的方法，包括液相色谱法、多维液相分离等方法。碳纳米管的液相分离方法主要包括电泳法、密度梯度离心法、管壁修饰法、凝胶色谱法和萃取法等。1.定义液相分离法是指将均匀液相或熔体通过某种机理分离成两种不同成份互不混溶的液相的方法。2.液相色谱法液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用*广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。近年来，在液相柱色谱系统中加上高压液流系统，使流动相在高压下快速流动，以提高分离效果，因此出现了高效（又称高压）液相色谱法。①液固吸附色谱高效液相色谱中的一种，是基于物质吸附作用的不同而实现分离。其固定相是一些具有吸附活性的物质如硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。②液液分配色谱法基于被测物质在固定相和流动相之间的相对溶解度的差异，通过溶质在两相之间进行分配以实现分离。根据固定相与流动相的极性不同，分为正相色谱和反相色谱。前者是用硅胶或极性键合相为固定相，非极性溶剂为流动相；后者是硅胶为基质的烷基键合相为固定相，极性溶剂为流动相，适用于非极性化合物的分离。③离子交换色谱法基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子对离子交换基具有不同的亲和力而实现分离。薄壳型离子交换树脂柱效高，主要用来分离简单的混合物；多孔性树脂进样容量大，主要用来分离复杂混合物。④凝胶渗透色谱法又称为尺寸排阻色谱法。1959年首先用于生物化学领域。以溶剂为流动相，多孔填料（如多孔硅胶、多孔玻璃）或多孔交联高分子凝胶为分离介质的液相色谱法。当混合物溶液入凝胶色谱柱后，流经多孔凝胶时，体积比多孔凝胶孔隙大的分子不能渗透到凝胶孔隙里去而从凝胶颗粒间隙中流过，较早地被冲洗出柱外，而小分子可渗透到凝胶孔隙里面去，较晚地被冲洗出来，混合物经过凝胶色谱柱后就按其分子大小顺序先后由柱中流出达到分离的目的。用凝胶渗透色谱的优点是：分离不需要梯度冲洗装置 ；同样大小的柱能接受比通常液相色谱大得多的试样量；试样在柱中稀释少，因而容易检测；组分的保留时间可提供分子尺寸信息；色谱柱寿命长。它的缺点是：不能分离分子尺寸相同的混合物，色谱柱的分离度低；峰容量小；可能有其他保留机理起作用时引起干扰。凝胶渗透色谱法为测定高聚物分子量和分子量分布提供了一个有效的方法，此外还可用来分离齐聚物、单体和聚合物添加剂等。⑤离子色谱法采用柱色谱技术的一种高效液相色谱法，样品展开方式采用洗脱法。根据不同的分离方式，离子色谱可以分为高效离子色谱 、离子排斥色谱和流动相离子色谱3类。高效离子色谱法使用低容量的离子交换树脂，分离机理主要是离子交换。离子排斥色谱法用高容量的树脂，分离机理主要是利用离子排斥原理。流动相离子色谱用不含离子交换基团的多孔树脂，分离机理主要是基于吸附和离子对的形成。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于液相分离法（一）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于酶标仪可以检测哪些项目：现如今，酶标仪的应用不仅在医疗行业，用于酶联免*疫学的检测工作，而且在食品卫生，农业，畜牧等产业以及各高等院校实验室中都有广泛的应用。酶标仪在医学上采用酶联免*疫吸附试验进行血液学，免*疫学，肿瘤免*疫学，传染病免*疫学，优生优育的血清学及基因实验。检测项目主要包含以下几项：1、传染病类：例如肝炎，艾滋病，衣原体，肺炎支原体，梅毒，水痘等。2、甲状腺：促甲状腺激*素，T3T4等。3、不孕症：性激*素六项，泌乳素，雌三醇，生长素，抗精子抗体等。4、优生优育：弓形虫抗体，巨细胞病毒，风疹病毒等。5、肿瘤标志物：癌胚抗原，甲胎蛋白，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，胃肠癌等。6、糖尿病：C肽，胰岛素，胰岛素抗体，胰岛素原等。7、过敏原，皮肤不耐受等。上海嘉鹏keebio-MR100酶标仪在食品以及农畜业的检测项目包括：营养成分，添加剂，农药残留量，菌毒*素，无机毒*素，致癌物质残留，有毒有害物质污染等。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于酶标仪可以检测哪些项目。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于超微量与普通分光光度计的区别：超微量分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器,应用液体的表面张力特性,样品体积只需要0.5~2μL,在检测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径,达到快速、微量、高浓度及不用石英管、毛细管等耗材检测吸光度的特点,被广泛应用于生命科学实验室蛋白质组学和基因组学等领域。超微量分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器信号处理器和显示与存储系统组成,与传统分光光度计有明显的不同。二者有以下7点区别:(1)所需样品体积小，仅需0.5 ~2μL; .(2)不需要比色皿,用移液枪直接将样品滴加到检测平台上,测量时样品自动形成液柱,检测完成后只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可;(3)一般具有1mm和0.2mm两个光程(电机控制自动选择) ,而传统分光光度计的光程为10 mm,分光光度计样品无需稀释,测量范围可达到常规分光光度计的50倍;(4)氙气闪光灯为灯源,代替了氘灯(紫外)和钨灯(可见) ,使用寿命更长;(5 )不需要预热,可随时检测;(6)显示吸光度值的同时,程序直接给出浓度值(核酸、蛋白和荧光染料) ;(7)体积比传统分光光度计小很多(用体积数值表述)。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于超微量与普通分光光度计的区别。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于薄层层析法原理：层析须在两相系统间进行。一相是固定相，需支持物，是固体或液体。另一相为流动相，是液体或气体。当流动相流经固定相时，被分离物质在两相间的分配，由平衡状态到失去平衡到又恢复平衡，即不断经历吸附和解吸的过程。随着流动相不断向前流动，被分离物质间出现向前移动的速率差异，由开始的单一区带逐渐分离出许多区带，这个过程叫展层。 　　  系数K是物质在两相中的浓度比。K值大，则在固定相中吸附牢，K值小吸附差。各物质间的K值差别大，则易被分离。不同类型层析的K值含义不同，可视为吸附平衡常数，分配常数或离子交换常数等。研究层析现象而发展的塔板理论，与有机化学实验中的分馏法原理有些相似。被分馏的有机溶剂在分馏柱内的填充物上形成许多热交换层，从而把低沸点溶剂先分馏出来，达到纯化的目的。在层析时用理论塔板数n来衡量层析效能。tR为物质在层析柱上的保留时间，W为洗脱下来的物质峰形的宽度。n值愈大表示层析柱的效能愈高。如用理论塔板高度H表示，则包含了层析柱长度的因子。 式中L为层析柱的柱长。H值越大，则柱效越低。 此外影响层析分离效果的还有涡流扩散、纵向扩散和传质阻抗等因素。因此选择层析固定相支持物的粒度、均匀度等物理性能，流动相的层析系统和温度等都是做好层析的关键。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于薄层层析法原理。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于薄层色谱法（五）应用：食品和营养食品中的营养成分是蛋白质、氨基酸、糖类、油和脂肪、维生素、食用色素等。与食品和营养有害的物质则有残留农药、致癌的黄曲霉素等。这些成分都可用薄层色谱法定性和定量。蛋白质和多肽水解为氨基酸，对不同来源的动物性和植物性蛋白水解后产生不同的氨基酸进行定性和定量，有助于解决蛋白质的结构和食品营养问题。二十多种氨基酸用硅胶G薄层板双向展开，一次即能分开，然后定性和定量，方法快速而简便。多糖和寡糖可水解为单糖，可用薄层色谱法进行单糖和双糖的定性和定量。文献上有每一个糖的Rf值和相应的展开剂。油和脂肪解为脂肪酸，脂肪酸的种类和结构中的不饱和键数，与营养和卫生有关，关于油和脂肪的薄层(硅胶、硅藻土、纤维素)分析，文献和综述很多。脂溶性和水溶性维生素在薄层上可方便地定性和定量，例如脂溶性维生素A，D，E，K及B2，B6，B12，酶酸，泛酸，叶酸，C，促生素在硅胶G薄层上可用苯:甲醇:丙酮:冰醋酸(7:2:0.5:0.5)分开。用硅胶G薄层和丙酮:氯仿(1:1)以及激发波长365nm和波长450nm，可用荧光法测定ng量的曲黄素B1,B2,G1,G2，法灵敏快速。药*物和代谢薄层色谱法在合成药*物和天然药*物中的应用很广。有些文献和内容偏重于合成药*物、化合物及其代谢产物，有文献为在中*草药分析中的应用。每一类药*物，例如磺胺、苯骈噻嗪、甾体激*素、抗*菌素、生物碱、强心甙、黄酮、挥发油和萜等，都包括几种或十几种化学结构和性质非常相似的化合物，可以在上述文献中找出一、二种全盘的展开剂，一次即能把每一类的多种化合物很好地分开。药*物代谢产物的样品一般先经预处理后用薄层分析，应用也很广，但有时因含量甚微，不如采用气相和高效液相色谱法灵敏。化学和化工化工和化学方面的有机原料和产品都可用薄层色谱法分析。例如含各种功能基的有机物，石油产品，塑料单体，橡胶裂解产物，油漆原料，合成洗涤剂等，内容非常广泛。医学和临床薄层色谱法的应用还渗透到医学和临床中去，例如它是一种快速的诊断方法可用于妊娠的早期诊断。方法是基于在孕妇的尿中能检出比未媳妇妇女的尿中含更多的孕二醇，把两者的尿提取后点在薄层上比较，即可作出判断。这一方法可不用动物而在2~3小时内化验出结果。毒物分析和法医化学十多种有机磷农药和六种有机氯农药都可在硅胶G薄层上分开并测定含量，可用于农药分析及其残留量分析。农药薄层层析有许多优点：它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15~20分钟;混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10~100倍，它既适用于只有0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。薄层层析的缺点是对生物高分子的分离效果不甚理想。  以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于薄层色谱法（五）应用：我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

尊敬的嘉鹏品牌用户：您好！!       因上海疫情还在高位运行，形势极其严峻。目前解封时间仍旧未定，乐观预计将可能在4月11-18日左右，具体请以上海市政府通告为准。一旦解封后，我们尽快将目前已签合同的订单发出，请您谅解！售前售后问题如您有售后问题，比如维修返厂等需求，建议您先联系我们在线客服或者当地办事处进行咨询，由于目前我们仓库无法正常收货，我们建议您先不要将货品寄回，以免造成物流遗失，可以等解封通知后再用快递寄出；      在疫情特殊时期，我们售前客服以及售后客服等均正常在线为您提供咨询和导购服务，您仍可正常签单，等解封后我们将尽快为您发货，您无需担心~办事处一览办事处联系人联系方式负责区域地址上海总部王培培13501668369上海、江苏上海市真陈路1398弄14、15号楼温州工厂销售部黄孙勇13957706028浙江、福建浙江省温州市龙湾区永兴街道兴朝路27号西安办事处马丽13772157831陕西、甘肃、河南陕西省西安市长安区西长安街168号长乐小区北京办事处丁先锋19921192965北京、天津、河北、内蒙古北京市海淀区西三旗桥南通厦集团宿舍公寓 A5区303房间广州办事处李国健19921583293广东、广西、海南广州市越秀区先烈中路76号中侨大厦15BC武汉办事处高超13641625218湖北、湖南、江西武汉湖北武汉武昌粮道街粮道街得胜桥38高号重庆办事处李玲琳13764178383四川、重庆、贵阳重庆市南岸区海棠溪聚丰江山里5栋15-8青岛办事处周率斌15711680211山东、山西山东省青岛市城阳区瑞阳路都霖美景二期26号楼一单元1301沈阳办事处张蓓13524109013辽宁、吉林、黑龙江沈阳于洪造化汀江街10-1号华润橡树湾二期合肥办事处张锐15821306986安徽合肥市蜀山区望江西路西湖国际广场B座2211室特殊时期，请您与我们一起共克时艰！一起为上海加油！！感谢您的理解和支持！

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于薄层色谱法（四）展开：展开展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的主要任务是溶解被分离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使各组分的Rf值在0.2~0.8之间并对被分离物质要有适当的选择性。作为展开剂的溶剂应满足以下要求:适当的纯度、适当的稳定性、低黏度 、线性分配等温线、很低或很高的蒸气压以及尽可能低的毒性。展开方式总的来讲平面色谱的展开有线性、环形及向心3种几何形式。A 单次展开 用同一种展开剂一个方向展开一次，这种方式在平面色谱中应用*为广泛。(垂直上行展开，垂直下行展开，一向水平展开，对向水平展开)B 多次展开 单向对此展开，用相同的展开剂沿同一方向进行相同距离的重复展开，直至分离满意，广泛应用于薄层色谱法C 双向展开 用于成分较多、性质比较接近的难分离组分的分离。薄层展开室需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5~1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中)，密封室盖，待展开至规定距离(一般为10~15cm)，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。影响展开的因素A 相对湿度的影响B溶剂蒸汽的影响(a 展开室的饱和b预吸附)C 温度的影响D 展距的影响与分离度仅正比与展距的平方根。折叠显色A 光学检出法a自然光(400~800nm)b紫外光(254nm或365nm)c荧光一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在纸或薄层上显出不同颜色的荧光斑点(灵敏度高、专属性高)B 蒸汽显色法显色多数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点，这种反应有可逆及不可逆两种情况，前者在离开碘蒸气后，黄褐色斑点逐渐消退，并且不会改变化合物的性质，且灵敏度也很高，故是定位时常用的方法;后者是由于化合物被碘蒸气氧化、脱氢增强了共轭体系，因此在紫外光下可以发出强烈而稳定的荧光，对定性及定量都非常有利，但是制备薄层时要注意被分离的化合物是否改变了原来的性质。C 物理显色法用紫外照射分离后的纸或薄层后，使化合物产生光加成，光分解、光氧化还原及光异构等光化学反应，导致物质结构发生某些变化，如形成荧光发射功能团。发生荧光增强或淬灭及荧光物质的激发或发射波长发生移动等现象，从而提高了分析的灵敏度和选择性。D 试剂显色法广泛应用的定位方法。用于纸色谱的显色剂一般都适用于薄层色谱，还有防腐剂的显色剂不适合用于纸色谱及含有有机黏合剂薄层的显色，又时喷显色剂后续加热，这也不是用于纸色谱。显色方法a喷雾显色:显色剂溶液以气溶胶的形式均匀的喷洒在纸和薄层。b 浸渍显色:挥去展开剂的薄层板，垂直的插入盛有展开剂的浸渍槽中，设定浸板及抽出速度和规定在显色剂中浸渍的时间。显色试剂a 通用显色剂硫酸溶液(硫酸:水 1:1，硫酸:乙醇1:1)、0.5%碘的氯仿溶液、中性0.05%高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液(还原性化合物在淡红色背景上显黄色斑点)b 专属显色剂⑸测定比移值在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。⑹ 薄层扫描薄层扫描法指用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测层析谱。对于中成药复方制剂，亦可用相应的原药材按需要组合作阴、阳对照，然后比较其薄层扫描图谱加以鉴别。使用仪器为薄层扫描仪。如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。 以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于薄层色谱法（四）展开。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于薄层色谱法（三）操作：薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2~0.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。手工制板一般分不含粘合剂的软板和含粘合剂的硬板俩种。常用吸附剂的基本情况:颗粒的大小，太大洗脱剂流速快分离效果不好，太细溶液流速太慢。一般说来吸附性强的颗粒稍大，吸附性弱的颗粒稍小。氧化铝一般在100-150目。氧化铝分为碱性氧化铝，适用于碳氢化合物、生物碱及碱性化合物的分离，一般适用于PH为9-10的环境。中性氧化铝适用于醛、酮、醌、酯等PH约为7.5的中性物质的分离。酸性氧化铝适用于PH4~4.5的酸性有机酸类的分离。氧化铝、硅胶根据活性分为五个级，上等活性*高，五级*低。黏合剂及添加剂:为了使固定相(吸附剂)牢固地附着在载板上以增加薄层的机械强度，有利于操作，需要时在吸附剂中加入合适的黏合剂:有时为了特殊的分离或检出需要，要在固定相中加入某些添加剂。薄层板的活化:硅胶板于105-110℃烘30分钟，氧化铝板于150-160℃烘4小时，可得活性的薄层板。点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样直径不超过5mm，点样距离一般为1~1.5cm即可。样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环--环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。点样方式有点状点样和带状点样。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于薄层色谱法（三）操作。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于薄层色谱法（二）：仪器与材料⑴载板变色硅胶用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求：需要有一定的机械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是**常用的。载板可以有不同规格，但**大不得超过20×20，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。⑵固定相(吸附剂)或载体薄层层析硅胶薄层层析硅胶**常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小，一般要求直径为10~40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5~0.7%)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。⑶ 涂布器薄层层析硅胶应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。⑷ 点样器定性:内径为0.5mm管口平整的普通毛细管。定量:微量注射剂。点样直径不超过5mm，点样距离一般为1~1.5cm即可。⑸ 展开室应使用适合载板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于薄层色谱法（二）：我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于薄层色谱法：薄层色谱法(TLC)，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。简介薄层色谱，或称薄层层析(thin-layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被广泛采用。基本原理薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，*终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf值)对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。迁移值薄层层析硅胶Rf=溶质移动的距离/溶液移动的距离。表示物质移动的相对距离。各种物质的Rf 随要分离化合物的结构，滤纸或薄层板的种类、溶剂、温度等不同而不同，但在条件固定的情况下，Rf对每一种化合物来说是一个特定数值。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于薄层色谱法。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于WB想做得又好又快？给你图文通关攻略：Western Blot是实验室*常用的技术之一，因为它广泛适用于检测和分析样品中的特定蛋白，并可揭示其活性和翻译后修饰的情形。然而…… WB易做，难精！做出条带很简单，想拿到漂亮且一致的结果却并不容易。理想很丰 满现实很骨感那么，WB干货资源哪里找？新版Western Blot学习中心是一个蛋白电泳和WB实验攻略大合集，让您从此告别东拼西凑翻资料，更轻松地找到所需的实用技术资源。如果您是实验萌新，可以通过它掌握技巧，排查问题，提高WB成功率；如果您已摸爬滚打过，也可通过新方法、新技术，事半功倍地产出漂亮结果。内容导航常见问题指南有杂带？背景高？信号弱？没条带？……WB结果太糟心，应该怎么破？针对WB实验的常见问题，我们总结了可能的原因与解决方案，助您下一次实验更顺利。技术贴士和要点WB是个多步骤的流程，需要根据样品特点或检测体系来优化。对于化学发光和荧光WB的每步操作，我们列举了技术要点，快来看看有没有被你忽略的小细节？实验操作大全手灌胶配方哪里找？如何制备各种WB缓冲液？实验前需要准备哪些试剂？正确的操作步骤和注意事项有哪些？你想要的WB实操指南就在这里。WB操作视频演示WB各环节的实验原理、操作方法和注意事项，覆盖电泳、转膜、印迹孵育、检测、成像分析和抗体剥离。每篇5分钟，打造基本功。技术资源库免费获取WB实验方法综述、技术贴士、应用指南、技术手册等丰富资源。例如：通过总蛋白归一化获得WB定量数据的新工具、多重荧光WB指南、高分子量蛋白转印指南等。听取专家解读免费观看在线讲座，抢先获得关于WB新技术、新工具的实用信息，并了解如何根据样品特点和检测需求，选择恰当的产品。 以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于WB想做得又好又快？给你图文通关攻略。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于液相不可忽视的溶剂过滤与样品过滤：实验室的液相，总是出现各种问题。今儿漏液了，   明儿压力高了，     耽误实验进度……是不是很无奈？是不是很惆怅？是不是很焦虑？漏和堵是液相*常见的故障，一般导致这些问题的原因是过滤没做好。颗粒物导致密封组件磨损严重直至漏液或堵塞系统造成压力高。在我们使用液相系统时会涉及到哪些过滤组件呢？跟小编一起来看看吧。1溶剂过滤（1）滤膜总听到有些客户说：“咦？买的滤膜怎么过滤流动相的时候溶了？”那小编问你，你的材质选对了吗？滤膜材质多种多样，跟不同的溶剂的兼容性也是各有不同，所以在选择、购买和使用滤膜时要特别注意，我们使用的流动相和滤膜材质兼容不？滤膜材质兼容性参考表（2）溶剂过滤头我们把流动相过滤超声脱气之后开始上机了，这时我们会把吸滤头放到溶剂瓶中。流动相溶剂吸滤头材质和形状有多重多样的，如玻璃砂芯、滤片、滤头等等。他们又各有优缺点，玻璃砂芯的不能超声，还容易在更换流动相瓶时磕碰碎掉，而另外的滤片和滤头相对而言就耐用一些，脏了可以用酸泡还可以超声处理。使用时不必战战兢兢了。（3）流路过滤器有些品牌的液相会在泵上配备有流路过滤器，可以对流动相进行再次过滤，有效去除系统由于磨损掉落的机械杂质。2样品过滤（1）针头过滤器在样品分析之前，通过过滤去除样品中的不容颗粒，将显著延长色谱柱的使用寿命。在柱色谱法之前，针头滤器过滤是*简单快速的小体积溶液过滤方法。（2）保护柱、在线过滤器、杂质捕集小柱样品经过针头过滤器过滤一次之后，通过进样器进入到液相系统中，有的样品比较脏比较费柱子，为了延长色谱柱的使用寿命可以在色谱柱之前加装保护柱或者在线过滤器，以达到保护分析柱的目的。在液相色谱分离过程中，特别在梯度洗脱过程中容易产生莫名其妙的色谱峰，鬼峰来源很多，其中主要来源于流动相和管路，如：有机相中污染物，水相中污染物，缓冲盐，流动相瓶和混合过程产生等等。加装捕集小柱解决鬼峰问题，不仅能够去除流动相中的杂质，还可以有效捕集管路和混合器中的杂质，杂质捕集小柱的安装位置与保护柱和在线过滤器有所差异，是安装在混合器之后，进样口之前。流动相和样品经过层层过滤之后顺利到达检测器，出个漂亮的图，心情美美哒，可以处理数据了。要想实验做得好，仪器维护少不了，在使用了缓冲盐后要及时的冲洗系统，对柱塞杆和密封圈及时的清洗维护，定期更换易损耗材。定期做期间核查和性能验证确保仪器性能良好。俗话说工欲善其事必先利其器，良好的实验结果是优良的仪器做出来的，所以一定要好好维护仪器哦。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于液相不可忽视的溶剂过滤与样品过滤。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于超微量光度计nano-800+： 产品介绍：nano-800+超微量光度计作为一款高再现性的分光光度计，采用基座和比色皿上样双检测模式，适用于更宽浓度范围的样品检测，操作简便，主要用来检测核酸浓度和蛋白质的纯度。产品特点：7寸电容触摸屏,优化设计的APP软件仅需0.5~2ul的微量样品即可进行纯度与浓度测量，样品可回收。新增OD600光路检测系统，新的比色皿模式，方便细*菌、微生物等培养液浓度的检测。极快的检测速度，每个样品可在5秒内测试完成。内置打印机直接打印报告。6800mmA锂电池（选配）。可通过USB闪存、SD-RAM卡输出，便于数据的分析和保存。荧光检测功能（选配），兼容常见荧光定量试剂。技术参数：型号：Nano-800+软件操作平台：  7寸电容触摸屏，安卓系统波长范围：185-910nm比色皿模式(OD600)：600±8nm样本体积要求：0.5-2.0ul光程：1mm、0.2mm、0.05mm、0.02mm 自动切换光源：氙闪光灯（寿命可达10年)检测器： 3648像素线性CCD阵列波长精度：1nm波长分辨率≤3nm(FWHM at Hg 546nm)吸光度精 准度：0.003Abs吸光度准确度：1%（7.332 Abs at 260nm)吸光度范围(等效于10mm)：0.02-300A;比色皿模式(OD600测量)：  0~4A测试时间： ≤5S核酸检测范围：2-17500ng/ul(dsDNA)数据输出方式：USB、SD-RAM卡样品基座材质：石英光纤和高硬质铝打印：内置热敏打印机锂电池6800mmA荧光检测：激发波长460nm发射波长525nm外观尺寸（mm）270x210x196以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于超微量光度计nano-800+。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于凝胶成像系统基础知识（二）：9.如何选择光学镜头?光学镜头是机器视觉系统中必不可少的部件，直接影响成像质量的优劣，影响算法的实现和效果。光学镜头规格繁多，有时不免头晕。光学镜头从焦距上可分为短焦镜头、中焦镜头，长焦镜头;从视场大小分有广角、标准，远摄镜头;结构上分有固定光圈定焦镜头，手动光圈定焦镜头，自动光圈定焦镜头，手动变焦镜头、自动变焦镜头，自动光圈电动变焦镜头，电动三可变(光圈、焦距、聚焦均可变)镜头等。10.常用的数据传输的方式是什么?IEEE1394总线是一种目前为止较快的高速串行总线，火线(IEEE1394)支持的传输速率有100Mbps,200Mbps，400Mbps，高的传输速度为400Mbps/s。对于各种需要大量带宽的设备提供了专门的优化，接口可以同时连接63个不同设备，IEEE1394同USB一样，支持带电插拨设备。IEEE1394同样支持即插即用，现在的WIN98SE、WIN2000、WINME、WIN XP都对IEEE1394支持的很好，在这些操作系统中用户不用再安装驱动程序，也能使用IEEE1394设备。11.软件功能包括哪几个方面?选择好成像系统后，配套的软件选择也很重要。硬件设备再好，如果不配上好的软件，也无法发挥它应有的功能。作为凝胶成像系统软件功能和用途都基本相似，这里我们介绍一下关注的几个特点：A、软件的基本功能：可对不同样品，如条带，斑点，细*菌克隆，芯片，细胞或者活体动物等，进行定性、定量分析，加批注，输出图像等操作。B、图像采集方式：对于化学发光或多色荧光产品，软件应具备电影模式，可以进行图像多祯累计功能来增强线性动态范围和数据准确度。C、操作简便，软件应具备操作辅助工具，使软件操作更简单易用。采用三步式泳道及条带分析，可以快速计算蛋白质和核酸的分子量及含量。D、数据库功能也是必不可少的，这样可以检索、分类或比较所有生成的图像。可利用不同的显示算法程序图像化显示条带差异。E、曝光方式：应采用单一曝光、多重曝光，累计曝光，延时(定时)曝光多种模式可选。F、记忆功能：软件能记忆并自动调用成像数据，这样你不用每次设置就能获得重复性好的结果。G、软件应配备两套以上，使用单机版，多用户版或网络版，用户可彼此独立操作，互不干扰，互不混淆。12、为何要采用自动变焦镜头，有何意义?自动变焦镜头无需手动调节，可操作性强，同时也减少了EB潜在的污染机会。再者使得将CCD内置成为了可能，从而达到防灰防尘防震的目的，更好地保护了核心部件延长产品的使用寿命。13、紫外对人体有伤害，是否具有防护措施?紫外对人体，特别是眼睛有一定伤害，嘉鹏凝胶成像系统具备紫外防护设施，在紫外灯开启的状态下，如不慎打开暗箱，紫外灯会自动熄灭防止对人体的伤害。14、能否在凝胶成像上直接切胶?嘉鹏凝胶成像可以，如需直接切胶，首先按系统中间的观察窗，打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口，然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门，即可进行切胶操作。15、如何调节焦距,聚焦,光圈以获得高质量的图片?三个重要的可调参数分别是焦距，聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度，聚焦调节图像大小，光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后，再调节聚焦将图像放到*大，*后调解焦距，在图像较大的情况下焦距比较容易调节到清晰状态，然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结凝胶成像系统基础知识（二）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白质纯化方法经典攻略（四）：固定相上结合的蛋白质要用可破坏结合作用力的溶剂条件进行洗脱。这些流动相的条件要根据层析类型和目标蛋白质的性质来选择。蛋白质洗脱方法通常包括以下三种：批次洗脱，阶梯式洗脱和线性梯度洗脱。如何选择*好的方法要依靠采用的层析方式和所需的分离效果来决定。1、批次洗脱 - 一步即将所有结合蛋白质一次性洗脱。基于特异性相互作用 （如亲层析）的层析方法*好采用这种方式。批次洗脱法没有任何分离效果，但它可以很好地快速去除杂质。它需要事先了解取代目标蛋白所需的缓冲液条件。2、阶梯式洗脱 - 连续进行多步批次洗脱，并每次逐渐增强洗脱条件。在阶梯式洗脱中，收集的组分数取决于连续批次洗脱的次数。阶梯式洗脱比批次洗脱的分离效果要好，但比线性梯度洗脱的效果要差。3、线性梯度洗脱 - 当流动相以线性梯度洗脱时可收集多种连续流出的组分。对于离子交换层析和疏水作用层析，线性梯度洗脱可以获得*好的分离效果，同时，它还可以收集到大量的连续组分。由于体积排阻层析中蛋白质和固定相之间不存在相互作用，因此不需要采用任何一种上述洗脱方法。蛋白质上样后，无需改变洗脱缓冲液的条件，即可连续不断地收集各分离组分至所有蛋白质全部被洗脱为止理想的情况是这根层析柱所采用的洗脱缓冲液同样可用于后续的层析柱，由此可省去两步之间必须的缓冲液置换或者透析操作。其它色谱方法羟基磷灰石（羟基磷酸钙）是*初在20世纪50年代中期描述的蛋白质纯化技术。球形羟基磷灰石的商业可得性使羟基磷灰石柱色谱法成为可及的技术。蛋白质与羟基磷灰石柱相互作用的机制是复杂的。蛋白质*常用磷酸盐梯度洗脱。羟基磷灰石与其他色谱技术具有不同的选择性，因此可以对有难度的蛋白纯化或作为*终“抛光”步骤提供有效补充。羟磷灰石层析已经成功地用于治*疗级抗体的纯化。色谱聚焦是一种基于其pI分离蛋白质的柱层析法。蛋白质结合到专门的离子交换介质上并用pH梯度洗脱。色谱聚焦的选择性不同于其他技术的选择性，因此可用作*终的“抛光”步骤。组分纯度分析每一次柱层析分离完成后，收集的组分必须进行分析以检测其所含的目标蛋白及各组分的相对纯度。每一步之后都需要进行该类分析以确定哪些组分可以被合并用于下一步。为检测纯度，必须有一种方法能检测出某种特定蛋白质相对所有蛋白质的含量。下列即为一些常用于纯度分析的方法:1、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） - 一种基于蛋白质尺寸不同来进行分离的变性凝胶。市售染色剂可使样品中所有蛋白质显色可见，可据此对蛋白质进行纯度分析（图10）。SDS-PAGE不能对组分进行大规模的分析，并且需要耗费数小时。但由于易操作、经济且适用于所有蛋白，因此它仍然是一种*常用采用的方法。图 10. 蛋白质纯化工艺中收集的蛋白质样品的SDS-PAGE检测结果。2、光谱分析 - 一种分析蛋白质光学性质的方法。这种用于蛋白质纯度分析的方法只适用于如细胞色素P450等具有独特光学特征的蛋白质。这一类蛋白质在某特定波长（420 nm附近 [40] ）有吸收而其他蛋白质没有，因此比较它在420nm和280nm处 （该波长处所有蛋白质均有吸收） 的吸收，即可获得该蛋白质的纯度信息。这个方法快速且可大规模操作，但仅使用于部分蛋白质。3、蛋白质测活 - 一种目标蛋白的酶活实验。这种测定蛋白质纯度的方法通常与其他蛋白质浓度测定方法相结合以计算其相对整体蛋白质浓度的活性。活性测试只适用于活性可以被高通量方法如酶解测活的蛋白质。对某些蛋白质而言，活性测试提供了一种快速可靠的蛋白质检测方法。酶的测活是非常有用的，因为这样在下一步应用前即可先将失活的蛋白质排除出去。纯化后蛋白保存当蛋白质纯度已满足实验研究的要求时，即可将其以合适的方式保存起来。*终保存用缓冲液的选择和纯化过程中选择所用的缓冲液一样重要，同样依赖于蛋白质的稳定性和纯化蛋白质后续应用所需条件来选择。通常，因为在SEC层析过程中可以完成缓冲液的有效置换，因此它通常被安排为整个纯化工艺的*后一步。纯化的组分可以立即合并保存，或者*后合并的组分也可以透析为所选的缓冲液后再保存。由于蛋白质的保存条件取决于目标蛋白本身，应将其优化至能长期保持蛋白质结构和功能稳定性的条件。在储存条件下，保存缓冲液中通常会加入一些添加剂用于延长纯化蛋白的保存期。由于每种蛋白质的表现各不相同，因此需要通过多次实验来寻找*合适的保存条件。膜蛋白细胞产生的约20-30％的蛋白质是整合膜蛋白，并且约50％的小分子药*物作用于膜蛋白质。因此，针对解决膜蛋白结构有极大的兴趣。纯化整合膜蛋白的关键步骤是它们从脂质双层的溶解，同时保留其功能完整性。典型的方法包括通过离心分离细胞内膜，随后洗涤剂溶解整合膜蛋白质并高速离心以除去不溶性膜残余物。大量的洗涤剂已被用于膜蛋白溶解，并且在没有文献或实验室先例的情况下，研究者将需要凭经验确定某特定蛋白质的*佳洗涤剂。然后通过本质上与可溶性蛋白相同的柱色谱法纯化溶解的膜蛋白。然而，纯化缓冲液将需包含洗涤剂以保持蛋白质处于可溶状态。膜蛋白的纯化通常非常具有挑战性，因为在从脂质双层初步移除和通过各种纯化步骤后蛋白质功能完整性和聚集的常常丧失。近来，纳米盘已经成功地用于B家族GPCR的亲和纯化。无论是蛋白研究还是应用，通常需要将蛋白利用不同的生物系统表达出来，然后进行分离和纯化。研究实验室通常需要纯化微克或毫克级别的蛋白质，而工业上需要纯化数千克甚至数吨的蛋白质。因此，蛋白纯化非常重要。纯化过程中，主要需要考虑宿主污染、样品的可溶性、蛋白结构的完整性和生物活性。分享了以上蛋白纯化的方法，希望对大家工作有所帮助。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结蛋白质纯化方法经典攻略（四）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白质纯化方法经典攻略（三）：离子交换层析离子交换层析分离蛋白的原理是基于其净电荷的不同，通过蛋白质与带电荷的固定相之间的静电作用力进行分离。IEX有以下两类: （1）阴离子交换层析 （固定相带正电荷，与带负电的蛋白质相结合）；（2）阳离子交换层析（固定相带负电，与带正电的蛋白质相结合）。离子交换层析常用于蛋白质纯化工艺中期。但是，对某些蛋白，在纯化工艺的前期或后期采用该方法亦可获得良好的分离效果。                                                                 图 5. 蛋白质净电荷受其溶剂pH值影响。当pH=pI时，蛋白质净电荷为0，因此既不与阴离子交换的固定相也不与阳离子交换的固定相相结合。调节pH值高于或低于pI值可使蛋白质带上净电荷，使其与阴离子交换树脂（pH > pI）的固定相或者阳离子交换（pH 由于氨基酸的基本结构和与其共价结合的修饰成分的影响，所有的蛋白质都会带有净电荷。由于溶剂可以与蛋白质相互交换氢离子，因此蛋白质的净电荷受其溶剂pH值的影响。蛋白质的等电点（pI）是蛋白质不带电时的pH值。当pH值高于pI时，蛋白质会带负电，而当pH值低于pI时，蛋白质带正电。因此，可以通过调节溶液的pH值来控制结合蛋白是与离子交换柱结合或是从柱上洗脱。理论上来说，只要缓冲液pH值调节合适，所有的蛋白质都可以与阳离子交换柱和阴离子交换柱结合。但是，蛋白质纯化过程中，选择纯化条件和层析柱类型时*重要的考虑因素就是要保持蛋白质的稳定性。因此，选择哪一种离子交换层析和选择什么样的条件会影响蛋白质稳定性和活性是必须要考量的。通常，一些与某类离子交换层析相结合的条件可能对某种蛋白质比对其他蛋白质更为合适。了解蛋白质等电点的知识可帮助寻找*合适的离子交换层析方法。以下在线工具可计算一个蛋白质的理论等电点 EXPASY。这些计算都完全基于蛋白质的氨基酸序列，不考虑其三维空间结构。而在实际情况中，一个蛋白质的某些残基可能暴露得比其他部分更多，所以，其实际pI和表面净电荷某些时候可能与理论计算值不尽相符  。氨基酸的相对位置分布同样会影响一个蛋白质的pI值 ，而这一点在理论计算时同样未予考虑。有些技术可通过实验方法测得蛋白质实际的pI值，如等电聚焦电泳 、等电聚焦毛细管电泳 和高通量光学测量法等 。蛋白质与IEX的结合必须采用较宽pH值范围的溶液进行多次尝试以获得*合适的蛋白质保留pH值。在pI值左右1个pH单位的溶液pH值通常认为是较合适的蛋白质结合pH值。但是，在有些情况下，也可能需要在远离pI值的pH值条件下进行 。图 6. 离子交换层析。蛋白质在低离子强度条件下与带电的固定相相结合。结合的蛋白质可以通过增加缓冲液的离子强度或者调节其pH值进行洗脱。IEX的固定相是由惰性琼脂糖或者高分子基质与带电基团共价结合组成。介质微粒有很多尺寸，可以无孔，也可以有多种不同尺寸的孔。介质的选择主要根据所需的结合能力、分辨率和流速要求来决定。介质颗粒尺寸越小，分辨率越高，但相应的流速也越低，分离时间也更长。多孔介质比无孔介质的结合能力更强。无孔介质中，蛋白质不能进入树脂内部，因此相比多孔介质，前者的样品回收率更高，分辨率更高，分离时间也更短。一个研究表明，对于大多数蛋白质，采用无孔介质和多孔介质的分辨率和回收率都类似，但对于尺寸较大的蛋白质，多孔介质由于体积排阻效应而在分辨率上有一定损失。IEX中*常用的4种带电官能团如下所示。它们根据离子交换能力的强弱分类，强离子交换基团可离子化的pH范围比弱离子交换基团的范围更大。阴离子交换 （固定相带正电）:1、季铵（Q） - 强阴离子交换基团2、二乙氨乙基（DEAE） -弱阴离子交换基团阳离子交换 （固定相带负电）:1、磺酸甲酯（S） -强阳离子交换基团2、羧甲基（CM） - 弱阳离子交换基团因为强离子交换基团的活性基团在很大的pH范围内均可保持带电，它可以在蛋白质结合所需pH值是特别强的酸性或碱性的情况下使用（假设该pH值下蛋白质稳定性仍得以保持）。有些蛋白质在弱离子交换上的保留较弱，使得它们可以用较低的离子强度洗脱 。由于高离子强度会影响部分蛋白质的稳定性，而弱离子交换不需要在极端的pH值条件下进行蛋白质的结合，因此可能对蛋白质更合适。离子交换色谱的固定相首先用低离子强度的缓冲液平衡，然后将蛋白质样品用和平衡过程相同离子强度的缓冲液上样到固定相。结合的蛋白质在用更高离子强度或pH值不同（图6）的缓冲液洗脱前先淋洗一段时间。洗脱缓冲液中的抗衡离子与带电的固定相相互作用，取代了柱上的蛋白质。在离子交换层析中，某些盐类代替结合蛋白和保持蛋白质稳定性的能力，可能比其他种类的盐可能更有效 。NaCl或KCl是洗脱液中*常用的盐类，其中Na+或K+是阳离子交换层析中的抗衡离子，Cl-是阴离子交换层析中的抗衡离子。另一方面，还可以通过调节缓冲液的pH值来减少蛋白质的电荷并破坏其与固定相之间的相互作用。对于结合到阳离子交换固定相上的蛋白质，增加缓冲液pH值会使蛋白质所带正电荷减少，因此可将其从柱上洗脱下来。对于结合到阴离子交换固定相上的蛋白质，降低pH值可减少蛋白质所带负电荷将其从柱上洗脱下来。同时，还可以调节缓冲液的pH值使目标蛋白质不与离子交换固定相相结合，而与此同时杂蛋白与固定相结合。如此，可在穿透液中收集目标蛋白质，而杂蛋白通过与固定相结合得以去除。与其他层析方法相比，离子交换层析在确定蛋白质结合、洗脱和获得足够高的分辨率的*佳条件时可能需要解决更多的问题。凝胶过滤层析凝胶过滤又称为分子筛及体积排阻，体积排阻层析是根据蛋白质具有不同的水力学半径将它们进行分离，该数据主要通过测量分子尺寸和形状两方面信息获得。与上述其他层析过程不同的是，蛋白质不与SEC的固定相相结合，而是依靠它们通过惰性固定相的速度不同来完成分离。图 9. 三种不同水力学半径的蛋白质混合物用体积排阻色谱柱分离。大蛋白因为不能进入介质孔道内部而只能直接流经柱体*先流出。稍小的蛋白质会进入介质孔道内部，流经的路径更复杂，因此需要更多的时间来穿过介质并流出柱体基于SEC可分辨不同种类蛋白的能力，它通常是一种用于*后一步纯化的有效方法。低聚物 、去折叠的蛋白分子和缺失蛋白都可以在逐渐置换缓冲液的过程中与结构完整的天然蛋白质分子分离开。通常，由于SEC可使用溶剂种类更多，所用的缓冲盐也更少，因此比透析的缓冲液置换过程更快也更可靠。整个SEC过程都只使用一种溶剂，而市购的SEC固定相几乎与所有常规的缓冲液兼容。固定相的类型和柱子的长度对蛋白质的SEC分离的分辨率有很大的影响。市场上有很多种固定相可选，其选择*好是根据待分离蛋白质分子的分子量和分离条件两方面来决定。与其他层析方法一样，SEC同样既有优点也有缺点。是否采用SEC要取决于蛋白质本身及其后续应用的要求。SEC的优点：1、可进行缓冲液交换和脱盐。2、可分离其他纯化技术难以分离的相似品种（如蛋白片段和低聚物）。3、可与多种溶剂相容。4、不依赖于蛋白质的任何一种特殊形式进行保留和洗脱。SEC的缺点:1、分离效果严重依赖柱子的填装效果。2、蛋白质与介质间有非特异性相互作用，会降低分辨率。3、对复杂的蛋白质混合物分辨率低。4、为保证足够的分辨率，上样量必须较小。这对沉淀得到的高浓度蛋白质是一个问题。要优化SEC条件以获得*好的分离效果，常常需要耗费大量时间，而一些因素会对分离效果产生非常大的影响。提高SEC分离效果的条件:1、上样体积尽量*小。上样体积越小，洗脱组分的扩散将会越弱。2、缓冲液中加盐。少量的盐有助于防止蛋白质与固定相间的非特异性相互作用。这将保证所有的蛋白质可以稳定地流过整个层析柱。3、采用合适的流速。流速过快使得小分子没有足够的时间流经介质孔道，流速过慢则会导致样品扩散时间增加。4、保证样品和溶剂的黏度接近。调整样品的条件使其与洗脱缓冲液的类似。5、调整层析柱长度。柱子过短使蛋白质分离不充分。而柱子过长则使得蛋白质样品扩散严重。6、重装柱子。柱子的填装效果会蛋白质的分离效果有相当大的影响。如果介质颗粒没有分布均匀或者填装时带入气泡，蛋白质将不能顺利地流过固定相。此外，如果柱子跑干了，就必须重装。柱子填装不好通常就是分离效果不好的原因。由于SEC并不是基于蛋白质官能团间的相互作用来进行分离，所有的蛋白质都在相同的条件下进行洗脱，所以分离效果仅仅依赖于蛋白质各自不同的水力学半径。因此，SEC通常不适合在含有较多杂蛋白的纯化工艺前期使用。但是，SEC又可作为一种快速可靠的样品脱盐或者小分子去除方法用于分离工艺前或中期。在纯化的*后阶段，当只剩痕量杂蛋白时，SEC则是一种蛋白质分离和置换保存缓冲液的有效方法。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结蛋白质纯化方法经典攻略（三）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

1、为保证内容正常显示，图片请使用本地上传。2、新闻内容不得添加电话、邮箱、QQ、网址、二维码等任何联系方式，新闻底部会自动添加联系我们的功能。那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白质纯化方法经典攻略（二）：初始样品制备无论目标蛋白的来源如何，作为纯化的初始步骤，原始样品的制备很重要。同时也需要考虑表达和纯化策略。目标蛋白的胞外分泌可使用简单快速亲和纯化方案；所需的唯*一样品制备可能需要倾倒贴壁细胞的条件培养基或者低速离心以去除悬浮细胞。当然，制备过程的**步色谱层析时可能需要加入蛋白酶抑制剂或者调节pH，但这些步骤简单易行。然而，如果**步纯化样品步骤进行离子交换，样品则可能需要首先脱盐。当处理大量条件培养基时可能会有技术难度；根据培养基的脱盐体积常可采用透析或错流过滤。如果靶蛋白在胞内表达，则细胞首先需要通过离心获取，然后用合适的裂解缓冲液重悬。如上所述，裂解缓冲液需要包含合适的缓冲液和其它添加剂以确保靶蛋白的*大稳定性。如果研究者在柱层析之前避免耗时的缓冲液交换步骤，则样品/裂解缓冲液的组成也需与随后的纯化步骤相适宜。接下来，需要有效的细胞裂解方法。大肠杆菌可以通过弗氏压碎器裂解（尽管这种方法不容易规模化），超声或基于洗涤剂的裂解（有很多商业裂解试剂）。通过向裂解缓冲液中加入溶菌酶可以改善基于洗涤剂的裂解效率。基于洗涤剂的裂解非常温和，且不导致细*菌DNA的显着切变。因此，为了降低样品粘度产生具有良好流动特性的样品，通常需要加入含DNA酶（高纯度制剂可商购）。哺乳动物和昆虫细胞也可以通过超声或基于洗涤剂的方法裂解。如果核膜显着裂解，可能需要DNA酶处理降低样品粘度。一旦细胞（微生物/昆虫/哺乳动物）被裂解，通常需要离心除去细胞碎片（通常在4℃下15000×g离心15分钟，以避免色谱柱堵塞）。所得上清液即可开始用于靶蛋白的柱色谱层析纯化。柱层析设备柱层析的基本原理是将一份蛋白质混合物分成很多小份，从而使某些组分中目标蛋白的浓度通过浓缩得以增大。虽然已经有很多昂贵和特殊的设备可用于柱层析，但实际上它只需要*基本的设备即可。基本柱层析设备1、固定相：一种惰性介质, 通常带有一种可促进蛋白质相互作用的官能团以进行蛋白质分离。固定相和官能团的选择取决于层析色谱和方法的种类。2、柱子：一种圆柱形玻璃容器，长度和直径各不相同。柱子可以直接购买已填装固定相能直接连接到层析设备上使用的预装柱，或可购买空柱自己手动填装。自动层析设备和人工重力柱使用的是不种类型的柱子。3、溶剂：含有添加剂的缓冲液，作为将蛋白质在固定相上平衡和洗脱的流动相。不同类型的柱层析需要不同的溶液条件。4、收集管：用于收集洗脱液样品的容器。自动组分收集器需要特定的收集管。手动收集时，则试管或容器均可使用。5、纯度检测方法：一种检测样品里所有蛋白质中目标蛋白相对含量的检测手段。每一步获得的含有目标蛋白的组分都必须在进行下一步纯化工作前进行检测。后面的章节将对一些常用的纯度分析方法进行讨论。层析系统柱层析可以依赖用泵将溶剂以固定流速打入填装好的层析柱的自动设备来完成或者依靠流动相的重力作用自己完成。自动系统或者重力柱系统均可与自动组分收集器连接使用。系统类型      优点     缺点自动设备自动运行常连接一台吸光度检测器可程序设定平衡和洗脱步骤可轻松设定梯度洗脱重复性好需要配套特定、昂贵的设备*大流速受层析柱压力限限制重力流便宜操作者可控性更强运行过程中可随时调节更依赖人工流速受重力作用限制表三：蛋白质分离柱层析系统亲和层析亲和层析主要依靠蛋白质与介质配体间特异性的可逆结合作用进行分离。配体可直接与目标蛋白质结合，也可以与蛋白质共价结合的标签结合。亲和层析通常是一种*粗放的纯化过程，一般在纯化工艺的前期应用。基于后续应用的要求，可能只需要一步亲和层析即可获得纯度合格的蛋白质。亲和层析的固定相是一种共价结合特异性配体的惰性介质，该配体可与一个蛋白质或一类蛋白质特异性结合。惰性介质通常是交联的琼脂糖或者聚丙烯酰胺。蛋白质可采用选择性或非选择性模式来进行亲和柱层析纯化。在选择性亲和柱层析中，一般使用对蛋白质有特异性作用的配体或共价结合的标签。在非选择性亲和柱层析中，如用于免*疫球蛋白纯化的蛋白A、G、L，用于DNA结合蛋白的肝素或用于糖蛋白的凝集素等，这些配体与一类蛋白都具有相似的结合能力。图 4. 用蛋白A、G、L进行亲和层析的原理示意图：A.抗体含有多个功能区：一类蛋白质的Fc区（片段，恒定区） 都是相同的，Fv区（片段，可变区）是每个抗体各不相同的特异区，Fab（片段，抗原区）是抗体实际与特异性抗原结合的区域。B.抗体的特异性区域可以通过亲和色谱进行非选择性纯化，在该过程中，配体 （蛋白 A、G、L）是结合在分离介质上的。C. 蛋白A、G、L亦可用于纯化特异性蛋白。这种情况下，抗体作为中间配体为其抗原提供选择性。 两类亲和色谱中，在不影响蛋白质（或标签） 和配体间作用力的条件下，蛋白质均在柱上保留。在不破坏特异性相互作用但可破坏所有杂蛋白与固定相间其非特异性作用的条件下，对所有结合的蛋白质进行淋洗。*后用含有竞争分子的缓冲液或者可破坏所有蛋白质间相互作用的条件对结合蛋白进行洗脱。竞争分子可代替目标蛋白与配体相结合。这种竞争分子可通过其他层析手段或者透析的方式从目标蛋白中去除。通过破坏所有蛋白间相互作用来从固定相洗脱蛋白的方法包括调节缓冲液的pH值或者离子强度。因为这些方法同样会影响蛋白质的稳定性，因此通常建议洗脱下来的蛋白质要立即中和或者稀释以将危害降到*小。有报道称，对于不同形式的亲和层析，为获得*高产率的活性蛋白需采用多种不同的流动相条件  。 目标蛋白配体伴随洗脱抗体（抗原特异性）抗原多肽自由肽多组氨酸标记蛋白Ni2+ or Co2+咪唑或游离组氨酸FLAG标记蛋白质FLAG特异性抗体FLAG多肽或低pH值GST标记蛋白质还原型谷胱甘肽游离谷胱甘肽Myc标记蛋白质Myc特异性抗体低pH值抗体（类型特异性）蛋白A , G, or L极端pH值DNA结合蛋白质肝素高离子强度表五：带有特异性活性官能团（配体）的选择性和非选择性亲和层析示例及其典型洗脱条件。总结自Thermo Fisher Pierce和GE。不同类型层析柱的供应商见下，由来邦网（Labome）基于200余篇文献调研给出。设计蛋白质表达质粒时，即可在其N端或C端（或在少数情况下，在结构已知蛋白质的柔性环状区域） 引入亲和标签以助于纯化。抗体通常是基于抗体与其抗原 （抗体识别的序列） 间的高特异性相互作用来进行纯化。一个含有抗原的多肽可以与带有抗体特异结合位点的介质相结合。降低流动相缓冲液的pH值可破坏抗体/多肽间相互作用力，释放出结合抗体。商业上，该方法常用于血清原液中抗体的纯化。蛋白质同样可通过非选择性方式进行亲和纯化。在非选择性纯化过程中，固定相上结合的配体可以与一类具有类似结合部位的蛋白质相结合。DNA结合蛋白质的纯化就是一个非选择性亲和层析的实例。因为肝素与DNA的结构和电荷极为类似，它可以被作为DNA结合蛋白质亲和层析的配体。由于所有的DNA结合蛋白质理论上都可以与该固定相结合，几乎其他所有蛋白质都会穿透而不与介质结合，从而可达到目标蛋白产率*大程度的富集。另一个例子是抗体通过其恒定区 （Fc）与配体间的相互作用进行富集浓缩，蛋白A、G、L都是常用的配体。GE Healthcare的蛋白A亲和层析柱 [15-17] 和蛋白G [18] 都是常用的选择。当采用类似的结合模式（抗体与蛋白A、 G或 L配体结合）时，抗体的抗原结合区（Fab）仍然保持与其特异性抗原结合的能力。因此，特异性蛋白可通过配体/抗体结合和抗体的抗原间的特异性相互作用来纯化。常见问题及解决方式见表6。问题原因解决方法蛋白不结合标签未翻译或不可及检查质粒序列或将标签移到其他位置结合条件不合适调节缓冲液条件结合时间不够降低流速或停止过柱以延长结合时间蛋白未洗脱出配体与标签间相互作用过强增大（特异性） 竞争分子浓度或调节条件更严格（非特异性）蛋白质柱上聚集调整缓冲液到更利于保持蛋白质稳定性的条件低分辨率流速过慢或过快调整流速柱子未充分洗脱用条件更严格的缓冲液淋洗；根据厂家指导清洗固定相蛋白质柱上聚集调整缓冲液到更利于保持蛋白质稳定性的条件洗脱条件不够严格增大（特异性） 竞争分子浓度，或调节条件（非特异性）纯化过程中蛋白质失活蛋白质去折叠或聚集调整缓冲液到更利于保持蛋白质稳定性的条件保持活性必要的辅因子在纯化过程中被除去添加辅因子 以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结蛋白质纯化方法经典攻略（二）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

1、为保证内容正常显示，图片请使用本地上传。2、新闻内容不得添加电话、邮箱、qq、网址、二维码等任何联系方式，新闻底部会自动添加联系我们的功那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白质纯化方法经典攻略（一）：蛋白质纯化工艺的建立建立蛋白质纯化工艺时，*重要的是需要考虑纯化得到的蛋白质应能满足其后续应用要求。蛋白质的数量及纯度都必须满足实验分析要求。而且，因为后续研究需要的是保持良好折叠结构的活性蛋白质，因此蛋白质行为的相关信息也需要考虑。在纯化及后续的保存过程中，很多处理方法都会对蛋白质的性质产生影响，如蛋白质的去折叠、聚集、降解和失活等。制定详细计划，在*短时间内完成蛋白质纯化，并在*稳定的条件下进行保存才算是成功地完成了其整个纯化过程。缓冲液体系每一步纯化过程中，蛋白质的溶液环境对其稳定性和活性的保持都非常关键。蛋白质应该保存在一个良好的缓冲液环境中，要避免突然的ph值变化，以其防止对蛋白质折叠状态、溶解性和活性造成不可逆的影响。缓冲液是一种含有共轭酸/碱对的水溶液。缓冲液的ph值范围根据其pka值决定。该pka值定义为50%的分子为酸式结构，50%为碱式结构时的ph值 （图1）。 tris 25°c的pka值是8.06，表示当ph=8.06，50%的tris是质子化（酸式结构），50%是去质子化（碱式结构）。关于缓冲液的一个常规原则是，其ph值应保证在pka值左右1个ph值单位范围内，从而保证其具有良好的缓冲能力。如此可以保证同时有足够的以酸式结构和碱式结构存在的分子在加入 h+ 或者 oh- 时可以将它们中和。这样，缓冲液就可以防止ph变化导致的蛋白质稳定性改变。一种好的缓冲液必须具有以下特征  :1、水溶性2、化学稳定性3、在所需ph范围内良好的缓冲能力4、与分析和实验应用条件具有良好的兼容性5、与其他溶质具有良好的兼容性很多物质都可以用于生物缓冲液。*常使用的缓冲液成分通常具有接近中性的pka值，可在生理ph值范围左右使用。表1列出了4种*常用的生物缓冲液、各自的ph值应用范围及各自可能对蛋白质纯化过程产生影响的优缺点。为保证足够的缓冲能力，这些缓冲液的浓度通常为25mm。缓冲液ph范围     优缺点磷酸缓冲液5.8-8.0ph值不随温度变化便宜紫外无吸收不能与二价阳离子一起使用mops缓冲液6.5-7.9不能高压灭*菌处理ph值一定程度上随温度变化在生理ph值范围内具有高缓冲能力hepes缓冲液6.8-8.2不能高压灭*菌处理ph一定程度上随温度变化一定条件下会生成自由基 tris缓冲液7.5-9.0ph值在一定程度上随温度或稀释程度变化便宜会对部分酶活性造成影响 紫外无吸收表一：蛋白质纯化中*常用的生物缓冲液缓冲液在一定ph值范围内可保持它们的缓冲能力，部分缓冲液成分会对某些层析过程或者分析实验造成影响。溶液添加剂除了一个合适的缓冲液体系，蛋白质纯化过程中——从溶菌到保存——所使用的溶液通常还含有很多其他对蛋白质纯度、稳定性和活性方面均具有一定作用的成分。溶菌缓冲液和纯化工艺的前期步骤中常常会添加蛋白酶抑制剂以防止目标蛋白质被内源性蛋白酶酶解。而纯化工艺的后期一般不用再添加这些蛋白酶抑制剂，因为此时几乎所有的蛋白酶都已经从目标蛋白质分离出去。蛋白质的保存缓冲液中通常要添加金属螯合剂，如edta或egta。这些金属螯合剂与 mg2+结合以防止目标蛋白质被所含的金属蛋白酶分解。还有一些其他的添加剂，主要是用来保护蛋白质不被破坏和增强其溶解性。类型功能      常用试剂还原剂防止氧化2-mercaptoethanol （bme）dithiothreiotol （dtt）tris （2-carboxyethyl） phosphine （tcep）蛋白酶抑制剂防止内源性蛋白酶分解蛋白亮抑肽酶 （丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶抑制剂）抑胃肽 （天冬氨酸蛋白酶抑制剂）pmsf （丝氨酸蛋白酶抑制剂）金属螯合剂使金属蛋白酶失活edtaegta精氨酸激酶稳定蛋白质结构，增强溶解性丙三醇去污剂（如chaps，np-40，triton x-100）糖（如葡萄糖、蔗糖等）离子稳定剂增强溶解性盐类 （如nacl、kcl、（nh4）2so4表二：蛋白质纯化中用于增强蛋白质稳定性的常用添加剂。添加剂只在必要时才使用。可能需要多次尝试才能确定某些添加剂是否对一些特定蛋白质的纯化工艺有效。 其他因素蛋白质纯化工艺中的其他因素也会对蛋白质的稳定性产生影响。对蛋白质的处理步骤越少越好，在*短时间内采用*少步骤的纯化工艺才能保证得到*高产率的活性蛋白质。而且，在整个纯化过程中，蛋白质*好都保持在低温状态。一般纯化过程都在4°c进行,因为这个温度既可以降低酶解速度（在含有蛋白酶的情况下），又可以保证蛋白质的结构完整性。表达体系对蛋白纯化的影响开始纯化蛋白前应先制备初始样品。真正进行蛋白纯化的操作之前，首要考虑是目的蛋白的来源。样品来源可为原始样品，例如肝脏，肌肉或脑组织。虽然后基因组学领域的研究者很少使用原始组织纯化蛋白，但当研究者想要关联某一蛋白序列的催化活性时，会有这样的需求。当前，更为常见的是从重组来源的样品纯化蛋白质。一些重要决定需要提前考虑以便优化后续的纯化。研究者需要考虑蛋白质的*终用途（例如酶测定，结构研究，抗体生成），因为这将决定*终蛋白质制备所需的量和纯度。尽管蛋白质表达的详细讨论超出本文范围，但是在这一点上仍有几个值得考虑的基本点，因为它们直接影响后续的蛋白纯化。哪个系统的表达水平*高？一般规则是，表达水平越高，越容易获得大量高度纯化蛋白。如果选择大肠杆菌表达系统，*终目的可溶性表达或不可溶表达是包涵体形式吗？由于包涵体中有高丰度的重组蛋白，包涵体的分离本身构成了纯化的重要步骤; 这必须与溶解难易和随后包涵体中再折叠靶蛋白的难易以及可溶性蛋白的*终产量相平衡。已经有许多工作优化了从包涵体中产生功能蛋白的产量。另一个考虑是是否靶向胞内或胞外（分泌的）表达。胞内表达需要将蛋白质从大量宿主细胞蛋白中纯化而来。相比之下，特别是当宿主细胞在无血清条件下生长时，目标蛋白的有效分泌要求蛋白必须从少量分泌的宿主蛋白中纯化而来。        以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结蛋白质纯化方法经典攻略（一）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购能。

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白纯化经验指南（含避坑清单）：蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来，是非常复杂的过程，有哪些坑，一起来看看师兄们为你趟的路吧蛋白纯化原则蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽，并可以迅速将蛋白与污染物分开，必要时可加入相应的保护剂（例如蛋白酶抑制剂），防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些分子量大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨率，常用离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性，柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离。程序分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。前处理分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。为此，动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种皮以免受单宁等物质的污染，油料种子*好先用低沸点的有机溶剂如乙醚等脱脂。然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆机破碎或用超声波处理破碎。植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。细胞的破碎比较麻烦，因为整个细胞壁的骨架实际上是一个借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子，非常坚韧。破碎细胞壁的常用方法有超声波破碎，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后，选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤的方法除去。如果所要的蛋白主要集中在某一细胞组分，如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等，则可利用差速离心的方法将它们分开，收集该细胞组分作为下步纯化的材料。如果碰上所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的，则必须利用超声波或去污剂使膜结构解聚，然后用适当介质提取。粗分离当蛋白质提取液（有时还杂有核酸、多糖之类）获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白溶液。有些蛋白提取液体积较大，又不适于用沉淀或盐析法浓缩，则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法进行浓缩。细分离样品经粗分级分离以后，一般体积较小，杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电点聚焦等作为*后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。结晶是蛋白质分离纯化的*后步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白一定是均一的，但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白，因此蛋白的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。离子层析法当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后用改变pH等办法将吸附的蛋白质洗脱下来。有机溶剂提取蛋白质纯化有机溶剂提取的原理是：与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白质在水中的溶解度显著降低；而且在一定温度、pH值和离子强度下,引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同，因此，控制有机溶剂的浓度可以分离纯化蛋白质。例如,在冰浴中磁力搅拌下,在4℃预冷的培养液中缓慢加入乙醇(-25℃),可以使冰核蛋白析出,从而纯化冰核蛋白。由于在室温下,有机溶剂不仅能引起蛋白质的沉淀，而且伴随着变性。因此,通常要将有机溶剂冷却,然后在不断搅拌下加入有机溶剂防止局部浓度过高,蛋白质变性问题就可以很大程度上得到解决。对于一些和脂质结合比较牢固或分子中极性侧链较多、不溶于水的蛋白质,可以用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂提取,它们有一定的亲水性和较强的亲脂性,是理想的提取液。冷乙醇分离法提取mian yi球蛋白*早由Cohn于1949年提出,用于制备丙种球蛋白。冷乙醇法也是WHO规程和中国生物制品规程推荐的方法,不仅分辨率高、提纯效果好、可同时分离多种成分,而且有抑菌、清理和灭病毒的作用。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于蛋白纯化经验指南（含避坑清单）。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于核酸浓度测量的230、260、280：在核酸、蛋白浓度检测过程中，230nm、260nm、280nm这几个数值经常会出现，那这几个数值代表什么？他们之间的*优关系又是什么呢？数值的意义：230nm：碳水化合物*高吸收峰的吸收波长，与A260的比值可进行核酸样品纯度评估。A230产生负值可能是由于在低核酸浓度的样液中存在一些干扰成分。260nm：核酸*高吸收峰的吸收波长，其吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸在260nm处都会一个*高吸收峰。280nm：蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光，通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处。其与260nm处的吸光度比值，经常被用于判断核酸样品的纯度。除了这三个常见的波长外，在核酸检测过程中340nm往往会被用来检测样品缓冲液的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0，如果不是，表明溶液中有悬浮物。  图为 核酸、蛋白质吸光度谱比值的意义：260/230、260/280纯度好的DNA或RNA，在pH7-8.5下：A260 / A280比值应大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。较纯净的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之间。比值降低往往是样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等。但实际样品情况往往要相对复杂，如《分子克隆实验指南》(第三版)所述，当 0.5％BSA蛋白质污染时，A260和A280的数值都下降，其结果是260/280的比值略微下降。但同时，蛋白残留会导致A230的数值明显上升，进而显著影响260/230的比值。也就是说，如果样品的260/280比值略低于标准值，但260 /230下降明显，那么就应该考虑污染原因是蛋白残留，而不是胍盐残留。酚的*大吸收峰在270nm。酚的残留会增加A230、A260和A280的数值，同时酚的吸收峰与核酸的吸收峰合并后，*大吸收峰会出现在270nm附近。因此当样品*大吸收峰会出现在270nm附近，且260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5，那么污染原因就应该考虑是酚残留。胍盐会在小于230nm处产生大的吸收峰，进而显著影响260/230比值，但胍盐残留不会影响A260、A280的数值，以及260/280的比值。也就是说，如果核酸样品的260/280符合要求，但260/230，那么污染原因就应该考虑是胍盐残留。   以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于核酸浓度测量的230、260、280。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白纯化方法，看看有你不会的吗？蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千中不同的蛋白质。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来,但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获得高纯度的制品。蛋白质提纯的总目标是设法增加制品纯度或比活性,对纯化的要求以合理的效率、速度、收率和纯度,将需要蛋白质从细胞的全部其他成分特别是不想要的杂蛋白中分离出来,同时仍保留有这种多肽的生物学活性和化学完整性。蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤:1、材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中稀释出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:(1)机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。(2)渗透破碎法这种方法是在低渗条件下使细胞溶胀而破碎。(3)反复冻融法生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。(4)超声波法使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。(5)酶法如用溶菌酶破坏微生物细胞等。2、蛋白质的抽提通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、triton X-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。3、蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法。(1)等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。(2)盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。(3)有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。4、样品的进一步分离纯化用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。5、紫外吸收法测蛋白质含量蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速、不消耗样品,测定后仍能回收使用。低浓度的盐,例如生化制备中常用的(NH4)2SO4等和大多数缓冲液不干扰测定。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其优良值。此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差,干扰物质多,在用标准曲线测定蛋白质含量时,对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质,有一定的误差。故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质,会出现较大的干扰。核酸的干扰可以通过查校正表,再进行计算的方法,加以适当的校正。但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的,虽然经过校正,测定的结果还是存在一定的误差。此外,进行紫外吸收法测定时,由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化,因此要注意溶液的pH值,测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于蛋白纯化方法，看看有你不会的吗？我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于蛋白质纯化方法一次性搞定，记得收藏噢：蛋白质结构复杂，实验人员是如何区分，分离纯化这些蛋白质的呢？蛋白质纯化有哪些方法？机理是怎么样的？跟嘉鹏一起来get新知识吧。能从成千上万种蛋白质混合物中纯化出一种蛋白质的原因,是不同的蛋白质在它们的许多物理、化学和生物学性质有着极大的不同,这些性质是由于蛋白质的氨基酸的序列和数目不同造成的,连接在多肽主链上氨基酸残基可是荷正电的、荷负电的、极性的或非极性的、亲水的或疏水的,此外多肽可折叠成非常确定的二级结构(α螺旋、β折叠和各种转角)、三级结构和四级结构,形成独特的大小、形状和残基在蛋白质表面的分布状况,利用待分离的蛋白质与其他蛋白质之间在性质的差异,即能设计出一组合理的分级分离步骤。可依据蛋白质不同性质与之相对应的方法将蛋白质混合物分离。分子大小不同种类的蛋白质在分子大小方面有一定的差别,可用一些简便的方法,使蛋白质混合物得到分离。(1)透析和超滤透析在纯化中极为常用,可去除盐类(脱盐及置换缓冲液)、有机溶剂、低分子量抑制剂等。超滤一般用于浓缩和脱色。(2)离心分离置换缓冲液许多酶富集于某一细胞器内,匀浆后离心得到某一亚细胞成分,使酶富集10-20倍,再对特定的酶进行纯化。差速离心,分辨率较低,仅适用于粗提或浓缩。速率区带法,如离心时间太长所有的物质都会沉淀下来,故需选择*佳分离时间,可得到相当纯的亚细胞成分用于进一步纯化,避免了差速离心中大小组分一起沉淀的问题,但容量较小,只能用于少量制备。等密度梯度离心常用的介质有蔗糖、聚蔗糖、氯化铯、溴化钾、碘化钠等。(3)凝胶过滤这是根据分子大小分离蛋白质混合物*有效的方法之一,注意使要分离的蛋白质分子量落在凝胶的工作范围内。选择不同的分子量凝胶可用于脱盐、置换缓冲液及利用分子量的差异除去热源。形状蛋白质在离心通过溶液运动时,或通过膜、凝胶过滤填料颗粒或电泳凝胶中的小孔运动时,都会受到形状的影响。对两种相同质量的蛋白质而言,球状蛋白质具有较小的有效半径(斯托克半径),通过溶液沉降时遇到的摩擦力小,沉降较快而显得比其它形状的蛋白质大;反之,在体积排阻色谱时,斯托克半径较小的球状蛋白质更容易扩散进入凝胶过滤填料颗粒内部,较迟洗脱出来,因而显得比其它形状的蛋白质要小。溶解度利用蛋白质的溶解度的差别分离各种蛋白质常用的方法。影响蛋白质溶解度的外界因素很多,其中主要有:溶液的pH、离子强度、介电常数和温度,但在同一的特定外界条件下,不同的蛋白质具有不同的溶解度。适当改变外界条件,控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度。(1)pH控制和等电点沉淀蛋白质在其等电点一般较不易溶解。(2)有机溶剂分离法蛋白质在不同的溶剂中的溶解度有很大不同,从基本不溶(300mg/ml)不等。引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同,故控制有机溶剂的浓度可分离蛋白质。水溶性非离子聚合物如聚乙二醇也能引起蛋白质的沉淀。(3)温度不同的蛋白质在不同的温度具有不同的溶解度和活性。大多数蛋白质在低温下比较稳定,故分离操作一般在0℃或更低温度下进行。电荷蛋白质净电荷取决于氨基酸残基所带的正负电荷的总和,如中性溶液中带净负电荷则称为酸性蛋白质。(1)电泳不仅是分离蛋白质混合物和鉴定蛋白质纯度的重要手段,而且也是研究蛋白质性质很有用的方法。等电聚焦分辨率很高,pI有0.02pH的差异就能分开。2D-PAGE分离蛋白质分辨率已经发展到100000个蛋白点。(2)离子交换层析改变蛋白质混合物溶液中的盐离子强度、pH和(阴、阳)离子交换填料,不同蛋白质对不同的离子交换填料的吸附容量不同,蛋白质因吸附容量不同或不被吸附而分离。洗脱可采用保持洗脱剂成分一直不变,也可采用改变洗脱剂的盐度或pH的方法洗脱,后一种可分为分段洗脱和梯度洗脱。梯度洗脱一般效果较好,分辨率高,特别是交换容量小,对盐浓度敏感的离子交换剂,多用梯度洗脱。控制洗脱剂的体积(与柱床体积相比)、盐浓度和pH,样品组分能从离子交换柱上分别洗脱下来。疏水性多数疏水性的氨基酸残基藏在蛋白质的内部,但也有一些在表面。蛋白质表面的疏水性氨基酸残基的数目和空间分布决定了该蛋白质是否具有与疏水柱填料结合从而利用它来进行分离的能力。因其廉价和纯化后的蛋白质具有生物活性,是一种通用性的分离和纯化蛋白质的工具。高浓度盐水溶液中蛋白质在柱上保留,在低盐或水溶液中蛋白质从柱上被洗脱,故特别适用于浓硫酸铵溶液沉淀分离后的母液以及该沉淀用盐溶解后的含有目标产品的溶液直接进样到柱上,当然也适用7mol/L盐酸胍或8mol/L脲的大肠杆菌的蛋白质提取液直接进样到柱上,在分离的同时也进行了复性。亲和能力结合效率高,分离速度快的特点。配基可以是酶的底物、抑制剂、辅因子、特异性的抗体。吸附后可改变缓冲液的离子强度和pH的方法,洗脱下来,也可用更高浓度的同一配体溶液或亲和力更强的配体溶液洗脱。按配基的不同可分为:(1)金属螯合介质过渡金属离子Cu2+、Zn2+和Ni2+等以亚胺络合物的形式键合到固定相上,由于这些金属离子与色氨酸、组氨酸和半胱氨酸之间形成了配价键,从而形成了亚胺金属-蛋白螯合物,使含有这些氨基酸的蛋白被这种金属螯合亲和色谱的固定相吸附。螯合物的稳定性受单个组氨酸和半胱氨酸解离常数所控制,从而亦受流动相的pH和温度的影响,控制条件可以使不同蛋白质相互分离。(2)小配体亲和介质配体有精氨酸、苯甲酰胺、钙调因子、明胶、肝素和赖氨酸等等。(3)抗体亲和介质即亲和层析,配体有重组蛋白质A和重组蛋白G,但蛋白A比蛋白G专一,蛋白G能结合更多不同源的IgG。(4)颜料亲和介质染料层析的效果主要取决于染料配基与酶的亲和力大小外,还与洗脱缓冲液的种类、离子强度、pH值及 以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于蛋白质纯化方法一次性搞定，记得收藏噢。我们上海嘉鹏科技有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家，欢迎大家前来订购

喜讯！嘉鹏“核酸蛋白分析仪”获上海市高转项目认定近日，嘉鹏品牌“核酸蛋白分析仪”喜获上海市高新技术成果转化项目认定，标志着公司创xin实力与科技成果产业化推广能力的进一步提升。核酸蛋白分析仪主要用于分子生物，能够开展各种常用的核酸蛋白纯化技术，如亲和层析、离子交换层析、脱盐和缓冲液交换，以及凝胶过滤。因此，这一系统可支持各种蛋白的纯化，包括标签蛋白、抗体、无标签的或天然蛋白，以及样品纯化。经第三方权威机构成果鉴定测试及科技查新，嘉鹏品牌“核酸蛋白分析仪”达到国内外先进水平，填补了国内相关领域空白。目前，核酸蛋白分析仪在国内各个实验室得到成功应用，用户反馈效果显著。迄今为止，嘉鹏科技旗下子公司上海金鹏分析仪器有限公司在多个领域连续荣获政府高转项目认定，我们将以此为责任和动力，再接再厉，为“助力科学研究，造国产好仪器”助力赋能。

2021年11月25日至28日，中国生物化学与分子生物学会2021年国内学术会议于云南昆明云安会都国际会议中心隆重举办。本站编辑受邀参会并特别采访大会参展商上海金鹏分析仪器有限公司总经理王培培。上海金鹏分析仪器有限公司（以下简称上海金鹏）成立于2007年，历经了14年的发展在行业内展露头角，在市场里站稳脚跟。其母公司上海嘉鹏科技有限公司成立于1998年，有着23年技术市场的沉淀在行业内形成一定的影响力。同时也为上海金鹏的未来长远发展奠定了坚实基础。上海金鹏是一家专注于生命科学和分析化学领域的仪器制造企业。公司自成立以来，依托于技术研发优势，先后自主研发的核心产品：凝胶成像分析系统、蛋白质纯化系统和超微量核酸蛋白测定仪等，在技术上取得了重大突破，行业中树立了自己的品牌。上海金鹏凭借过硬的研发实力和chuanxin能力，于2021年3月2日获得了由上海市科学技术委员会、上海市财政局、国家税务总局上海市税务局联合颁发的“高新技术企业”认定证书，由此正式迈入国家高新技术企业行列。王总介绍做为本次生化大会的受邀参展单位，上海金鹏为大家展示了分子生物学仪器的蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪等高新技术产品。展会中参展的蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪一经推出便受到广大科研人员的极大兴趣。通过深入调查了解发现广大科研人员对于科研设备的成本与功能之间存在着不充分不平衡的矛盾，由于市场上缺少基础功能的蛋白纯化设备，科研人员虽然只用到设备的基础功能却无奈要承担高额费用去购买多功能优异设备，造成了不必要的浪费。为解决该矛盾上海金鹏打造出了一款具有性价比的先进蛋白质纯化系统，让科研工作者不再需要花费上百万元经费去购买复杂功能设备而是仅仅花费十几到二十几万就可以购买到满足其需求的设备，为广大科研工作者节约了大量成本。Blupadstart是上海金鹏自主研发的产品，一个小巧玲珑紧凑的一体化纯化系统，主要是由两个三通阀、一个蠕动泵、uv检测仪、电导率仪、手动计样器等多个部分组成。结合国际的先进经验，以及国内用户的使用习惯，此系统提供了一个快速而可靠的解决方案，消除手工操作的麻烦，是一款可以轻松实现蛋白纯化从手动到自动的转变并且具有性价比的蛋白质纯化系统。该一体化系统，特别适用于科研实验室、高校、药厂等单位使用。不但消除手工操作的繁琐过程，而且功能很全、上手操作简单易学，弥补了客户对基础功能产品的市场需求的空白，为高校教学、科研人员提供了便利。王总介绍到该系统在不到10个月内已经完成了18次操作软件版本的更新迭代，力求在保证设备稳定运行的前提下，大力chuangxin，使设备工艺更加优化，从而实现满足科研工作中更高的需求。此外王总还给我们展示了国外优异品牌设备使用效果与上海金鹏产品的使用效果对比图，对比结果显示几乎完全一致。王总给我们展示对比结果的同时讲述到这套自主研发系统的来之不易。上海金鹏的chuangxin发展离不开嘉鹏科技在行业内20多年的技术沉淀。在经历*初的一代机模拟技术，以及早期的底层排线工艺等多方面的技术积累，才有了后期的UV主机以及其他多方面技术的升级换代，从而*终研发出了此款蛋白纯化系统。正是这几十年间一点一滴的积累与进步才做到同外企品牌同样的效果，同时也打造出了行业内属于我们自己的国产品牌。 金石为开，鹏程万里。王总希望上海金鹏能够以实干笃定前行，继续研发制造出更多的与国际接轨、适合国内科研用户使用的高性价比的中优异系列科研设备仪器。坚持“助力科学研究，造国产好仪器”的理念，为客户创造价值而努力，为国产仪器发展而奋斗。注明：转载至生物器材网，https://www.bio-equip.com/news.asp?ID=453086774

产品介绍：Nano-800超微量核酸蛋白测定仪（超微量分光光度计）作为一款高再现性的全波长分光光度计，采用基座和比色皿上样双检测模式，适用于更宽浓度范围的样品检测，操作简便，不仅可用于测量DNA，RNA纯度、浓度，测量蛋白质浓度，也可用于一般物质分析中的吸光度检测。产品特点：7寸电容触摸屏,优化设计的安卓系统软件无需预热，5秒即可完成检测，结果直接输出为样品浓度。5分钟内无操作，将自动关闭光源，以延长使用寿命。软件图形界面简单易用，操作更为直观，结果可直接导出。仅需0.5~2ul的微量样品即可进行纯度与浓度测量，样品可回收。外置打印机（选配）直接打印报告。技术参数：型号：Nano-600Nano-800软件操作平台：  7寸电容触摸屏，安卓系统7寸电容触摸屏，安卓系统波长范围：185-910nm；185-910nm；比色皿模式(OD600)：600±8nm600±8nm样本体积要求：0.5-2.0ul0.5-2.0ul光程：0.2mm、1.0mm 自动切换0.05mm、0.2mm、1.0mm 自动切换光源：氙闪光灯（寿命可达10年)氙闪光灯（寿命可达10年)检测器： 3648像素线性CCD阵列3648像素线性CCD阵列波长精度：1nm1nm波长分辨率≤3nm(FWHM at Hg 546nm)≤3nm(FWHM at Hg 546nm)吸光度精 准度：0.003Abs0.003Abs吸光度准确度：1%（7.332 Abs at 260nm)1%（7.332 Abs at 260nm)吸光度范围(等效于10mm)：0.02-300A;0.02-300A;比色皿模式(OD600测量)： 0~4A0~4A测试时间： ≤5S≤5S核酸检测范围：2-4500ng/ul(dsDNA)2-17500ng/ul(dsDNA)数据输出方式：USB、SD-RAM卡USB、SD-RAM卡样品基座材质：石英光纤和高硬质铝石英光纤和高硬质铝锂电池无6800mmA外观尺寸（mm）270x210x196270x210x196

产品介绍Keebio-MR100全自动酶标分析仪，是对酶联检测（EIA）实验结果进行读取和分析的专业仪器。本产品广泛地应用在生物学、农业科学、食品和环境科学的应用研究中。产品特点采用7寸高分辨液晶电容触摸屏，无需键盘，操作简单直观，易用。9通道垂直光路，酶标孔中心自动定位功能。内置软件即可实现动力学、标准曲线、定性、质控等检测；软件包含了程序生成和储存，以及检测数据存储功能，存储容量大；功能强大的曲线拟合、动力学分析及报告功能。具备振板功能，振板时间和速度可调。多种数据输出接口，方便数据传输和处理导出到Excel。孵育器（选配） 温控范围：室温+4℃至50℃技术参数光源6V 10W 进口卤素灯重复性【0，3.0）≤0.3%, 【3，4.0）≤2%波长范围340～850nm稳定性【0，3.0）≤0.3%，【3.0，4.0）≤2%滤光片8位滤光片轮，标配405，450，492，630nm 准确性【0，2.0）≤ 0.005A，【2.0，3.0）≤ 1%，【3.0，4.0）≤ 1.5%吸光度范围0.000-4.000Abs灵敏度灵敏度≥0.010分辨率0.001Abs通道差异（1.0Abs标准滤光片）线性度（0，2.0）≤±1%；【2.0，4.0）≤±2%测量速度单波长孔，双波长5s/96孔波长示值误差≤±3nm外形尺寸（mm）280x432x220波长重复性≤±1.5nm净量(kg)10

产品介绍：馏分收集器型号 JP- blupad FC是生物化学实验和生物药品生产的基本设备之一,用于自动定量收集层析柱中流出的液滴,达到把不同活性组分装到不同试管中去的目的。产品特点：可任意设定参数、设定首管、末管；采用7寸电容液晶触屏显示、控制;可根据时间、滴数、峰值、程控进行收集(独立使用) ;通过联机运行Blupad 1.0控制软件可按体积、阙值收集; ( 联机使用)耐腐蚀设计：适用于水溶性溶剂和有机溶剂的柱层析分离实验。65°斜角控制面板设计，符合人体工程学，不需费力弯腰就能轻松控制。采用方型设计及悬挂式的X–Y移动方式，换管定位准确；★技术参数:显示方式：液晶中文蓝屏显示收集试管：100支每支容12ml（标配)、16支每支容量100ml （选配)、36支每支容50ml（选配)、169支每支容量5ml(选配)定时范围：1秒–999小时59分59秒任意选择    定滴范围：1滴–9999滴任意选择               定峰范围1–200mv任意选择              程控范围1–10段任意选择                    移动方式：悬挂式X–Y移动换管控制：12V直流电磁阀操作方式：全中文菜单式程序数：1–10个/模式显示方式：中文液晶超大蓝膜LCD显示试管盘架：方型设计带废液槽、自由组合，可选配断电数据保存：十年连续工作时间：大于200小时