不同稀释液对过氧化氢灭菌生物指示剂计数的影响

作为评估灭菌效果的核心工具，生物指示剂的性能直接关系到灭菌验证的有效性。根据2023版《药品GMP指南》-<质量控制实验室>生物指示剂的要求，生物指示剂在入厂验收时需要进行芽孢数量确认。对生物指示剂芽孢计数的要求，GB 18281.1-2024《医疗保健产品灭菌 生物指示物第1部分：通则》中有明确规定，在有效期内，制造商或第三方机构使用制造商给出的方法检测出活菌的数量，应介于制造商标定值的50%~300%之间。

而在过氧化氢灭菌生物指示剂芽孢计数过程中，操作人员、计数方法、实验材料、仪器设备、环境等均可能影响计数结果。其中，稀释液往往是一个容易被忽视且重要的实验变量。今天，我们针对过氧化氢灭菌生物指示剂芽孢计数过程中稀释液选择的问题，进行一次深入的交流。

在不同的标准中，对过氧化氢灭菌生物指示剂稀释液的描述存在差异：那么，这三种常见的稀释液中，到底哪一种能给出最稳定、最准确的计数结果呢？对此，我们选取了泰林同一批次的过氧化氢灭菌生物指示剂（COA总芽孢数为2.4×106CFU/片），在其他条件完全一致的情况下，仅替换稀释液，进行了对比测试。

                                                                                                                结果分析

不同稀释液过氧化氢灭菌生物指示剂48h计数结果如下：

    灭菌纯化水：芽孢回收率在88%~104%之间，回收率平均值为97%，效果最好且组间波动最小，且菌落生长快速，培养24小时即获得明显的菌落。

0.1%胰蛋白胨的生理盐水溶液(TPS)：芽孢回收率在70%~103%范围内，回收率平均值为89%，组间波动较大，且TPS芽孢计数过程中菌落生长缓慢，24h菌落较小，通常需要48h后才能进行计数。 

磷酸盐缓冲液（PBS）：芽孢回收率在70%~89%范围内，回收率平均值为79.3%，效果最差，菌落生长速度和灭菌纯化水接近。

综上，不同稀释液的计数结果存在差异，且三种稀释液中灭菌纯化水的计数结果最好。因此，在芽孢计数过程中需关注稀释液的选择，为确保计数结果的准确性和可靠性，泰林在过氧化氢灭菌生物指示剂的计数方法中，已明确将“灭菌纯化水”作为稀释液。此外，根据ISO 11138-7要求，在验证生物指示剂含菌量时，用户应遵循制造商所提供方法和材料的建议，因为方法和材料的差异可能对结果有重大影响。

泰林全系列在售生物指示剂产品，均配套了详细计数方法说明，用户可通过扫描产品说明书的二维码查看对应的芽孢计数方法，实操便捷、合规可控。