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高分辨三重四极杆质谱定量测定复杂基体中导向肽的新方法

2008/03/13 14:38

阅读:3

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发布时间:
2008/03/13
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方案摘要:

前言 目前一般生物标志物实验的终点是发现公认的标志性蛋白名单,接下来的一步就应该是在扩展患者群体内完成对这些靶向蛋白的定量测定,以评价它们作为标志物的有效性。对这些在复杂基体中的靶向蛋白进行可靠的定量分析,其分析准确度和精密度是必需的。对低丰度蛋白质进行高通量检测,对于宽动态范围、高灵敏度和稳健性都有严格的要求。基于串连质谱的选择反应监测(SRM)流程,对于复杂生物基体中所研究蛋白的特异肽可以进行高灵敏度合高选择性的定量,同时也可以独立进行生物标志物验证1-4。该方法的主要优点是具有很低的检测限,即,该方法可以在具有高化合物背景的复杂基体中检测低浓度水平肽,同时保证良好的定量准确度和精密度。 由于大多数标志性蛋白没有标准品可用,所以,为进行蛋白定量有必要对SRM实验中所出现的峰进行鉴定。传统实验中,经常应用SRM模式MS/MS 全扫描,通过数据库搜索,对导向肽进行鉴定5。得到全扫描MS/MS质谱图的另外一个好处是可以对选择母离子-子离子跃迁的方法进行改进,获得最大灵敏度。然而,当肽峰和基体中的同量异位干扰化合物产生共淋洗时,就损害了MS/MS扫描图谱的质量2。相较于SRM实验而言,该方法的检测限也较高。另外,在一个LC运行周期中,该方法对肽同时进行鉴定和定量的循环时间过长,因而其应用受到了限制5。 另一个鉴定导向肽的方法是增加监测的每个肽产生的b-或者y-型离子的数目6。该方法应用三级四极杆质谱SRM模式,通过搜索标记物来对导向肽进行可靠的鉴定,在灵敏度、工作循环时间和选择性方面都很好,获得了最佳检测结果。 两种方法的成功都取决于仪器选择母离子的能力。二者均需要母离子通过离子中性碰撞穿过第一级质量分析器Q1离解。这样,干扰化合物穿过Q1时的时候被削减,从而提高了检测信号的质量。大多数商品化仪器采用单位分辨(0.7 FWHM)进行母离子选择。Thermo Scientific生产的TSQ Quantum Ultra质谱仪是唯一可以进行高分辨(0.2 FWHM)母离子选择的三级四极杆质谱仪,可以采用高选择性反应监测模式(H-SRM)。这就极大的降低了背景化合物的干扰,并保证了高传输效率7。此外,该仪器可以监测LC运行中超过每段300对的H-SRM离子跃迁,并采用定量增强数据关联扫描(QED-MS/MS)来进行肽序列鉴定4。这些独特的优点使得TSQ Quantum Ultra质谱仪成为定量分析蛋白质组的理想仪器。 本文验证了TSQ Quantum Ultra质谱仪在用于人血清消解液中待测肽的定量分析时,显示出高选择性和高灵敏度的优势。研究建立了通过高分辨率的母离子分离和导向肽多碎片离子时间序列检测,同时进行导向肽的鉴定和定量的测定方法。将该方法与传统的SRM模式MS/MS肽定量检测方法进行了对比,其中,TSQ Quantum Ultra质谱仪采用定量增强数据关联扫描(QED-MS/MS)方法,4000 Q TRAP® 质谱仪(Applied Biosystems, Foster City, CA)采用多反应监测模式增强子离子扫描(EPI MS/MS)方法。H-SRM方法的分析精密度和应用TSQ Quantum Ultra/4000 Q TRAP质谱仪的SRM方法分析精密度在相同的传输数和驻留时间条件下做了对比评价。最近对H-SRM方法的定量准确度也进行了评价。

产品配置单:

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