培养基迅速变黄原因+解决方法

　　培养基的颜色主要来自酚红，酚红指示颜色非常灵敏，pH值范围为6-8，颜色由黄变为紫红。为了培养方便，能让我们直观地感觉培养液的状况，加入酚红后，如果培养液偏酸，就显示偏黄色，偏碱性则会显示偏紫色。一般来说，污染细菌或者长时间不换液时，培养基变成黄色，主要是因为细菌和细胞过度增长，产生了酸性物质。　　　　培养基迅速变黄原因：　　　　1.有可能是二氧化碳缓冲的，培养基PH值的变化会造成培养基颜色的变化，有些细胞的培养基也会变黄。　　　　2.血清浓度：大于15%培养液即偏黄。　　　　3.如果怀疑污染，最可能的是支原体，一般在培养两周左右细胞基本全部死亡。　　　　解决方法：　　　　1.细胞培养液中一定要加HEPES，作用是稳定液体的PH。HEPES的化学全称位呱嗪乙硫磺酸(N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid )。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。　　　　2.以培养基颜色的变化作为换液的指标，是不够，但很实用。因为培养液中有指示剂酚红存在，故液体颜色的变化可间接提示细胞生长的状态。细胞生长旺盛，产酸，液体呈黄色；反之，液体会呈紫红色。　　　　3.在观察细胞时，液体ph变化大，会对细胞产生伤害，对细胞生长不利。　　　　4.是否所有的细胞培养基均适用同样的CO2浓度？　　　　其实不然，CO2浓度的选择取决于NaHCO3浓度。CO2和溶液中的-HCO3形成缓冲体系，使得整个培养体系的pH值维持在弱碱性(7左右)，这也是哺乳动物细胞生长的最适pH值。当培养基长时间暴露在空气中是，-HCO3会迅速分解，pH值快速升高，视觉观感上即是从红变紫。当再次将培养基放到细胞培养箱中后，在CO2的作用下，又会缓慢地从紫变回红色。　　　　不同的细胞培养基的NaHCO3浓度不一样，使用不用的细胞培养基应选择与之对应的CO2浓度：　　　　NaHCO3 (g/L) 浓度<1.5时，所需CO2浓度为4%；　　　　NaHCO3 (g/L) 浓度处于1.5-2.2时，所需CO2浓度为5%；　　　　NaHCO3 (g/L) 浓度处于2.2-3.4时，所需CO2浓度为7%；　　　　NaHCO3 (g/L) >3.5时，所需CO2浓度为10%。