靶向脂类化合物与自噬相关蛋白中亲和力检测方案(分子互作分析仪)

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检测样品: 化药新药研发
检测项目: 其他
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发布时间: 2022-08-17
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诺坦普科技(北京)有限公司

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近年来,PROTAC 等靶向蛋白降解技术通过特异性降解致病蛋白的机制,为药物开发提供了具有前景的新策略。但事实上许多非蛋白生物分子在疾病中同样是重要的致病因素,例如脂滴 (Lipid droplets, LDs) 的异常积累就会导致肥胖、心血管疾病、脂肪肝和神经变性等疾病的发生。然而,脂类与蛋白不同,它不能被泛素化,无法被 PROTACs 这样的泛素化依赖技术直接降解,这也为开发 LD 等非蛋白分子的降解技术带来了极大的挑战。

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检测样品:脂滴,自噬相关蛋白,化合物检测项目:靶向脂类的化合物与自噬相关蛋白亲和力检测应用领域: 制药方案摘要:近年来,PROTAC 等靶向蛋白降解技术通过特异性降解致病蛋白的机制,为药物开发提供了具有前景的新策略。但事实上许多非蛋白生物分子在疾病中同样是重要的致病因素,例如脂滴 (Lipid droplets, LDs) 的异常积累就会导致肥胖、心血管疾病、脂肪肝和神经变性等疾病的发生。然而,脂类与蛋白不同,它不能被泛素化,无法被 PROTACs 这样的泛素化依赖技术直接降解,这也为开发 LD 等非蛋白分子的降解技术带来了极大的挑战。方案详情: 2021年7月8日,复旦大学生命科学学院鲁伯埙与丁澦课题组在 Cell Research 杂志上发表文章 Degradation of lipid droplets by chimeric autophagy-tethering compounds,在其曾经发表的原创技术—自噬小体绑定化合物 (AuTophagy-TEthering Compounds, ATTECs) 的基础上,实现了将靶向降解技术从蛋白到非蛋白领域扩展的重大突破。化合物设计在这项研究中,团队将 LD 探针 (SIII和SIV) 与自噬相关蛋白 LC3 的结合小分子 (GW和DP) 连接,设计出了化合物 LD·ATTECs,它可以一端与 LDs 或甘油三酯(TAG)结合,另一端与 LC3-II 结合,形成三元复合物,从而使脂类被自噬体识别并降解(图1)。图1. LD/TAG - LD·ATTEC-LC3 三元复合物的形成,及其介导脂质降解的作用机制MST 技术应用为了验证 LD·ATTECs 化合物与 LC3 的特异性结合,研究者通过微量热泳动(Microscale Thermophoresis,MST)技术分别检测了四种 LD·ATTECs(C1-C4)与 LC3 之间的相互作用力,精确地观测到亚微摩尔级到微摩尔级的 Kd 值。作为对照,LD 探针 (SIII 和SIV) 未检测到与 LC3 结合(图2)。不同于其他互作技术只依赖于分子量变化检测,MST 技术可以通过结合引起的分子量、电荷及水化层的改变来表征样品间的亲和力,灵敏度高,尤其适合于小分子化合物检测。研究结果研究者用化合物 C1 和 C2 处理小鼠 MEF 细胞和 SH-SY5Y 细胞系,观察到 LD 显著降低,从而验证了 LD·ATTECs 可以在体外与脂滴发生特异性结合,从而显著降解脂滴。而用 Atg5 敲除的细胞系(自噬受到抑制)作为对照重复该实验没有观察到 LD 的降低,证明在前述实验组中,化合物对 LD 的降解作用依赖于自噬。团队还观察到经过 LD·ATTECs 处理的 MEF 自噬体或溶酶体数量无显著变化,从而证明 LD·ATTEC 仅特异性地将 LD 靶向自噬小体,而不影响细胞整体的自噬水平。最后,研究者将 C3 和 C4 化合物注射到肥胖 (db/db) 小鼠模型以及非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 小鼠模型的体内,观察到小鼠体重下降和脂肪水平显著降低的结果,从而验证了 LD·ATTECs 的体内降脂效果。 仪器链接 https://www.instrument.com.cn/netshow/C438212.htm
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诺坦普科技(北京)有限公司为您提供《靶向脂类化合物与自噬相关蛋白中亲和力检测方案(分子互作分析仪)》,该方案主要用于化药新药研发中其他检测,参考标准--,《靶向脂类化合物与自噬相关蛋白中亲和力检测方案(分子互作分析仪)》用到的仪器有NanoTemper Monolith 生物分子互作检测仪