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头孢氨苄中有关物质检测产品配置单(液相色谱柱)

  • 应用领域: 制药/化妆品
  • 检测样品: 化学药
  • 检测项目:限度检查
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  • 发布时间:2017-11-21
  • 参考标准:2015年版《中国药典》头孢氨苄有关物质项下方法
在C18系列色谱柱中,使用资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(A6AD04229)色谱柱分析头孢氨苄有关物质结果最优,能够实现杂质对照溶液及高温破解所得分离度溶液的分离。在供试品溶液分析中,由于浓度较高,△-2-头孢氨苄被包于主峰中,客户反馈属正常现象,单独考察低浓度头孢氨苄与其异构体△-2-头孢氨苄的混合溶液分离情况,能够达到1.17的分离度结果。 在头孢氨苄及其异构体△-2-头孢氨苄的分离中,相比C18柱,资生堂CAPCELL PAK PFP S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(TQAD01002)色谱柱能够达到分离度为4.84的良好分离结果,在杂质对照溶液及供试品溶液的分析中,能够得到满足药典分离要求的良好结果,供客户参考。
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2015年版《中国药典》头孢氨苄有关物质的分析

 

客户提供了头孢氨苄工作对照品、杂质7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸、α-苯甘氨酸、-2-头孢氨苄对照品和80℃条件下破解供试品溶液所得的分离度溶液。现要求本实验室选择合适的C18色谱柱,实现头孢氨苄的有关物质分析

在头孢氨苄有关物质分析中,流动相为高水相条件,故本实验室首先尝试使用能在高水相下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(柱号:A6AD04229 ,对80破解所得分离度溶液进行分析,结果见图1


图1 80℃破解溶液及空白溶液分析所得色谱图C18 AQ色谱柱)

*注:峰上所标数字为分离度,下同。


如图1头孢氨苄主峰保留时间为21.09 min,主峰与前后杂质分离度分别为2.423.37,达到药典要求的基线分离。

 

进一步分析杂质对照品溶液和供试品溶液,如图2,杂质7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)和α-苯甘氨酸的分离度为11.19,符合药典要求。


图2 杂质对照品溶液分析所得色谱图C18 AQ色谱柱)


如图3,对供试品溶液进行分析,各杂质间分离度良好

图3 头孢氨苄供试品溶液分析所得色谱图(C18 AQ色谱柱)


客户要求考察低浓度(10 μg/mL)下头孢氨苄与其异构体-2-头孢氨苄的分离情况,在客户允许调整柱温(30~40)的前提下进行分析,如图4,当柱温设定为30时,头孢氨苄与-2-头孢氨苄的分离度最佳,为1.17


图4 头孢氨苄及△-2-头孢氨苄混合溶液分析所得色谱图(C18 AQ色谱柱)


为使客户有更多色谱柱选择,本实验室又进一步尝试了资生堂中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII以及高碳载量色谱柱SUPERIOREX ODS进行分析。

使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱在30条件下对头孢氨苄及其异构体-2-头孢氨苄进行分离,分离度为1.05,分离效果不及CAPCELL PAK C18 AQ;使用SUPERIOREX ODS色谱柱进行分析,分离度为1.18,分离效果略优于AQ柱,但在分析破解所得分离度溶液时,杂质峰形及分离效果不佳。

 

在对头孢氨苄及其异构体-2-头孢氨苄的分离中,本实验室也尝试使用键和金刚烷基团的高表面极性色谱柱CAPCELL PAK ADME和键合五氟苯丙基、对同分异构体有良好分离能力的CAPCELL PAK PFP色谱柱进行尝试。

由于ADME色谱柱保留较强,在原梯度条件下未得到待测物洗脱,提高梯度条件中有机相比例后,亦未得到理想的分离效果;而使用CAPCELL PAK PFP S5; 4.6 mm i.d. × 250 mmTQAD01002)色谱柱进行分析,能得到4.84的分离度(见图5)。表1为各色谱柱分离度结果对比。


图5 头孢氨苄及△-2-头孢氨苄混合溶液结果(PFP色谱柱)


1 各色谱柱分离度结果对比(色谱柱规格S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm


进一步,使用PFP色谱柱在原色谱条件下对供试品溶液、杂质对照溶液、-2-头孢氨苄对照溶液、高温破解溶液及空白溶液进行分析。供试品溶液中各杂质能得到良好分离,主峰头孢氨苄与杂质-2-头孢氨苄分离度为1.78(见图6),杂质对照品溶液中7-ADCAα-苯甘氨酸的分离度为7.28(见图7)。


图6 供试品溶液、空白及-2-头孢氨溶液分析所得色谱图(PFP色谱柱

7 80破解溶液及杂质对照溶液分析所得色谱图(PFP色谱柱


综上实验结果,在C18系列色谱柱中,使用资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mmA6AD04229)色谱柱分析头孢氨苄有关物质结果最优,能够实现杂质对照溶液及高温破解所得分离度溶液的分离。在供试品溶液分析中,由于浓度较高,-2-头孢氨苄被包于主峰中,客户反馈属正常现象,单独考察低浓度头孢氨苄与其异构体-2-头孢氨苄的混合溶液分离情况,能够达到1.17的分离度结果。

在头孢氨苄及其异构体-2-头孢氨苄的分离中,相比C18柱,资生堂CAPCELL PAK PFP S5; 4.6 mm i.d. × 250 mmTQAD01002)色谱柱能够达到分离度为4.84的良好分离结果,在杂质对照溶液及供试品溶液的分析中,能够得到满足药典分离要求的良好结果,供客户参考。

         

 

 

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