磷霉素中含量及有关物质检测方案(离子色谱仪)

2 离子色谱法测定磷霉素及其有关物质 潘广文赛默飞世尔科技(中国)有限公司 目的：建立抑制型电导检测离子色谱法测定磷霉素和其有关物质的方法，提供了控制磷霉素质量的一种新的思路。 引言 磷霉素(Fosfomycin)是中国药典2010版收载的品种，其鉴别、含量测定和杂质检查方法操作繁琐复杂。鉴别采用的是显色法、薄层色谱法和红外光谱法，其中显色法操作繁琐、耗时。含量测定采用的是微生物检定法。杂质二醇物检查采用的是碘化钾-硫代硫酸钠滴定，淀粉显色指示法。离子色谱法检测阴离子是其主要的优势项目，专属性好、灵敏度高，且可同时测定多种阴离子，已广泛应用于多种阴离子的检测。本方法采用离子色谱分离电导检测，可以同时进行磷霉素的鉴别、含量测定和有关物质检查。 仪器 离子色谱仪(Thermo ScientificTM ICS-2100免试剂系列)，配置： -等度泵 -脱气机单元 -淋洗液发生器 -柱温控制箱 -高压六通进样阀 -电导检测器 AS-AP自动进样器(Thermo ScientificTM ) KOH淋洗液发生罐(Thermo ScientificTM EGC Ⅲ，P/N 074532) Chromeleon Chromatography Data System 6.80 去离子水， 18.2 MQ-cm (Thermo Scientific GenPurePro UV-TOC， P/N 50131948) 磷霉素(中国药品生物制品检定所，每毫克相当于651单位) 标准溶液的制备 标准贮备溶液1 精密吸取磷霉素标准溶液(1.0mg/mL)1mL， 置10mL量瓶中，加去离子水稀释并定容至刻度，摇匀，备用。 标准系列溶液 分别精密吸取混合标准贮备液1(磷霉素100mg/L)1、2、5、10、20、50mL置6个100mL的量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，得到磷霉素浓度分别为1，2、5、10、20、50mg/L标准系列溶液。 样品前处理 样品：精密密磷霉素样品50mg，置于50mL容量瓶中，加氢氧化钠碱液适量，加水定容至刻度，摇匀配制成样品溶液。取样品溶液适量，配制成1.5mg/L、15mg/L过0.22pm滤膜，取续滤液，待测。 实验条件 分析柱： lonPac AS 18(250×4 mm， 7.5 um)( P/N 060551)保护柱： lonPac AG 18 (50×4mm， 11 um)(P/N 060549)淋洗液： KOH梯度淋洗，由KOH淋洗液发生器产生梯度程序： 0-5min， 5mmol/L，5-18min， 5-16mmol/L，18-42 min， 16-24 mmol/L， 42-51min，40mmol/L，51-56min， 5mmol/L 流速： 1.0mL/min 进样体积：25pL 柱温： 30℃ 检测方式：抑制型电导检测， ASRS 300(4mm)电解自再生抑制器(P/N 064554)，自循环模式，99 mA 系统压力：：~~2000 psi 背景电导：<0.7 us 噪音： <2.0nS 运行时间：56 min 结果与讨论 色谱柱的选择及淋洗液条件优化 尝试lonPac AS19和lonPac AS18色谱柱，但在上述AS19色谱柱中水中，色谱峰峰形较差；在lonPac AS18色谱柱中，各杂质离子分离良好，且主峰峰形对称性好，因此最终选择各杂质离子分离度好且磷霉素色谱峰对称的lonPac AS18色谱柱。 在上述色谱条件下，标准品的色谱图如图1所示。 图1.标准溶液色谱图(磷霉素15mg/L) 方法的重现性、线性范围和检出限 将其中一个浓度标准系列溶液连续进样7针，磷霉素保留时间的RSD均小于0.6%，峰面积的RSD均小于1.5%。将上述标准系列溶液分别进样分析后，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标建立标准曲线，各离子的线性范围、回归方程、相关系数和检出限均见表1。 实际样品分析 取磷霉素样品，按上述样品前处理方法处理和上述色谱条件进样分析，其测定结果见表2，色谱图见图2。 表2.实际样品测定结果 名称 峰面积 主要杂质峰面积 杂质总面积 15mg/L 7.3519 / / 1000mg/L / 0.8883 1.1681 以自身对照法， 15mg/L样品溶液色谱峰峰面积大于1.0mg/mL产品中的杂质峰面积总和，产品中的杂质含量较低。 离子色谱法测定磷霉素的含量和有关物质，方法灵敏度高、专属性强，样品前处理简单，可用于磷霉素的质量控制。 ( [1]衷红梅，宋艳玲，杨欣，等.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定注射用磷霉素钠含量.药物分 析杂志， 2006，26(11)：1678-1679. ) 免费服务热线：8800810 5118 SCIENTIFIC 支持手机用户)