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共有 4 人回复了该问答求助:本人做的药材提取物,用waters ESI UPLC-MS液质联用,样品离子流图如下,怎么继续改条件呢?
 回复v3081294发表于:2016/6/4 12:17:11悬赏金额:10积分 状态:已解决

样品是中药提取物,浓度为35mg/ml,稀释多少倍合适呢
还有对照品用甲醇溶解可以吗,流动相是乙腈和0.1甲酸水,对照品浓度为0.2ml,应该稀释多少倍啊,我稀释了1000倍,对照品没有一个我要的主峰,全是其他不相关的小峰。
sun-shadow 回复于:2016/6/5 22:29:08
问题1:你木有说你的目标物是什么,所以很难直接给你一个参考色谱条件。更重要的是,水提物,极性过大,非常难做,因为普通C18反相色谱柱上木有保留。建议用HILIC柱子试试。
你有标准品,铁定是已知物了,可以查文献参考别人的色谱条件。如果你不太熟悉液相的话,建议多查查文献。直接用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS做色谱条件优化有点浪费,话说你实验室很有实力啊,而且UPLC对样品净化的要求高,你要仔细过滤。千万别把机器给堵了。
你有UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS,所以定性时,不止可以用保留时间定性,更准确的是你可以根据目标物质核比,也就是它的质谱信息做定性,比保留时间更准确~~~
问题2:中药水提物,我估计90%概率含多糖含量很高,你要结合很多方法来纯化,普通市售C18-SPE小柱是不行的~因为木有保留~你可能需要使用,离子交换,大孔树脂,凝胶等多种手段~
 回复  1# sun-shadow  回复于:2016/6/5 11:06:18
本人上学时,做过一段天然产物化学,希望我的经验对你有帮助。
看你帖子的意思,是想要通过与对照品(标样)做对比,在中药提取物中找到与对照品相同的目标物。现在你找不到,所以你怀疑是你的稀释浓度不对。
首先,你先要确保你的对照品出峰良好,确保你分析的液相条件正确,你并没有在帖子里贴出。
然后,保证有正确的色谱条件后,你要在样品离子图中,相同保留时间附近,寻找你的目标物,这时,因为是成分非常复杂的中药粗提物,你从TIC图上找,很难找到。你需要提取你目标物的离子。在提取离子图里找,这样可以发挥[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质超强的去本底能力。
然后,如果找到了,算你运气好,如果没找到,正常。
我不太清楚你的扫描模式,如果你的目标物比较少,建议你直接整个MRM,去本底能力最强,找到的可能性最大,你图太小我看不太清你的扫描模式。
如果还找不到,与其怀疑你的浓度上的不对,还不如怀疑你的粗提物中有东西将你的目标物遮挡。此时,一味增大浓度显然不可取。过大的浓度破坏峰型,损伤仪器,然后,很有可能你还是找不到。虽然你上了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质,但[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质也不是万能。
我的建议:
1,如果你的粗提物量比较大,请耐心使用层析方法,分离纯化一下,因为你有目标物,可以根据目标物的化学性质,有目的的纯化,哪怕是简单的萃取呢。
2,如果你并不确定粗提物里有没有目标物,而只是作为快速大通量初筛。那难度要大点了。显然,你的目标木在粗提物中是少量甚至痕量,即便是初筛,看你总离子流图,杂质还是太多,还是有目的的萃取一下,再上质谱。重点是去掉多糖,去掉大量成分。针对少量成分,在筛查。用MRM筛吧。
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